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氨基酸分析方法的研究進展

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2025年07月26日 21:05

第33卷2005年3月

分析化學(xué)(FENXIHUAXUE) 評述與進展

ChineseJournalofAnalyticalChemistry

第3期398~404

評述與進展

氨基酸分析方法的研究進展

于泓

1,2

牟世芬

(中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心,北京100085) (哈爾濱師范大學(xué)化學(xué)系,哈爾濱150080)

摘要對目前應(yīng)用于氨基酸分析的主要方法作了較詳細評述。這些方法包括柱后衍生高效陽離子交換色譜法、柱前衍生反相高效液相色譜法、高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測法等。引用文獻73篇。關(guān)鍵詞氨基酸,色譜法,評述

1 引言

迄今為止,自然界中已發(fā)現(xiàn)180多種氨基酸,其中參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸只有20多種,稱為基本氨基酸。氨基酸主要有兩種存在形式,一種是以游離態(tài)存在于生理體液(血漿、尿)、食品(酒、飲料)中,另一種是以結(jié)合態(tài)存在于肽和蛋白質(zhì)中。由于氨基酸分析在蛋白質(zhì)化學(xué)、生物化學(xué)、食品科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究中起著重要的作用,因此,對氨基酸分析方法的研究與改進得到人們高度重視。1958

[1]

年,Spackman等首先提出了用陽離子交換色譜與柱后茚三酮衍生結(jié)合的方法分析蛋白質(zhì)中的氨基酸,實現(xiàn)了氨基酸分析的自動化。其后,人們不斷地發(fā)展新的氨基酸分析方法,柱前衍生反相高效液相色譜法、高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培檢測法等相繼應(yīng)用于氨基酸分析?，F(xiàn)已是多種氨基酸分析方法并存、互補。本文就目前應(yīng)用于氨基酸分析的主要方法作一綜述。

2 柱后衍生高效陽離子交換色譜法

高效陽離子交換色譜(HPCEC)-柱后茚三酮衍生光度檢測分離測定氨基酸是一種經(jīng)典的氨基酸分析方法。此方法是利用氨基酸在酸性條件下形成陽離子而在陽離子交換柱中分離,分離后的氨基酸用茚三酮衍生、紫外可見光度檢測器檢測。采用陽離子交換色譜分離、柱后茚三酮衍生光度檢測技術(shù)的商品化的自動氨基酸分析儀在20世紀60年代初問世?，F(xiàn)在的自動氨基酸分析儀已實現(xiàn)了程控自動化和數(shù)據(jù)處理電腦化,分析時間已縮短至1h以內(nèi)。

目前,專用氨基酸分析儀的色譜柱主要是以磺酸型強酸性陽離子交換樹脂為柱填料。該樹脂是由苯乙烯和二乙烯基本聚合后磺化而成,球狀樹脂的粒度一般在5~10Lm之間,交聯(lián)度多為8%~12%。流動相一般采用3~5種不同pH值的緩沖液(檸檬酸鈉或檸檬酸鋰等)。氨基酸的分離不僅受離子交換樹脂的型號、交聯(lián)度和粒度的影響,還受柱溫、洗脫緩沖液的陽離子類型、pH、離子強度、淋洗梯度、流速以及其中有機溶劑含量的影響。

由于大多數(shù)氨基酸在紫外可見光區(qū)無吸收,因此必須將其衍生、轉(zhuǎn)化為具有紫外可見吸收或能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)才能檢測。茚三酮是最常用的柱后衍生化試劑。采用茚三酮作柱后衍生試劑的方法被認為是這一技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法(AOAC采用的氨基酸分析標(biāo)準(zhǔn)方法)。這種方法的優(yōu)點是準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好,能測定大量氨基酸及其同系物。方法的不足是靈敏度不高,只可對100pmol以上的氨基酸進行準(zhǔn)

[2]

確分析,而且需要雙波長檢測,在440nm處檢測脯氨酸,在570nm處檢測其它氨基酸。

為了提高分析靈敏度,用熒光胺代替茚三酮作柱后衍生試劑,采用熒光檢測,可檢測幾個pmol的氨基酸

[3]

。熒光胺與氨反應(yīng)的靈敏度比茚三酮與氨反應(yīng)的靈敏度大約提高了3個數(shù)量級。這樣,測定中

2003-07-16收稿;2003-11-17接受

本文系國家重點基礎(chǔ)研究計劃(973)項目(No.2003CB415001)和國家自然科學(xué)基金(No.20475060)資助課題

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