利用斑馬魚評價孕婦用化妝品安全性

【評價原理】

孕婦用化妝品的潛在安全性區(qū)別于常規(guī)化妝品主要體現(xiàn)在對化妝品的生殖毒性方面，例如造成卵巢發(fā)育的影響，對胎兒的影響等。利用斑馬魚技術(shù)可以對孕婦用化妝品進(jìn)行安全性評價，主要參照GBT 35517-2017評價方法。

【實(shí)驗(yàn)方法】

隨機(jī)選取3 mpf野生型AB品系斑馬魚雌魚于2 L繁殖盒中，分別水溶給予不同濃度的受試物，每個濃度2缸，每缸5尾，同時設(shè)置正常對照組（暴露于養(yǎng)魚水中），在28℃室溫培養(yǎng)，培養(yǎng)21天。用Elisa方法測定卵黃蛋白原含量（VTG是卵黃蛋白的前體，卵黃蛋白是胚胎和幼體早期發(fā)育主要的營養(yǎng)來源。通過測定斑馬魚卵黃蛋白原含量，可以評價樣品的生殖毒性）；各實(shí)驗(yàn)組雌魚分別于正常繁殖的雄魚進(jìn)行交配繁殖，觀察各實(shí)驗(yàn)組雌魚的產(chǎn)卵數(shù)量，與正常對照組雌魚比較；隨機(jī)挑選30枚各實(shí)驗(yàn)組斑馬魚雌魚產(chǎn)下的F1代胚胎（6hpf），于正常條件下培養(yǎng)至5dpf，各實(shí)驗(yàn)組F1代胚胎的毒性反應(yīng)和致畸性數(shù)量與正常對照組進(jìn)行比較；測量并統(tǒng)計(jì)卵巢重量，制作卵巢組織切片。上述指標(biāo)反映孕婦用化妝品的安全性。（周期：45天 供試品用量：約500g ）

【評價指標(biāo)】

1、VTG卵黃蛋白原含量

2、雌魚生殖力（產(chǎn)卵數(shù)）、子一代發(fā)育毒性

3、卵巢重量、卵巢組織切片

【結(jié)果表示】

1、VTG卵黃蛋白原含量（柱狀圖）

圖1. VTG卵黃蛋白原含量

2、生殖力（產(chǎn)卵數(shù)柱狀圖 略）、發(fā)育毒性

圖2. 發(fā)育毒性表型圖（供試品組與實(shí)驗(yàn)對照組相比，出現(xiàn)卵黃囊吸收延遲、肝變性、腸腔異常、心包水腫，提示供試品有發(fā)育毒性）

H=Heart；L=Liver；Y=Yolk sac；In=Intestinal tract；J=Jaw；B=Brain；M=Muscle；E=Eye；SB=Swimming bladder

3、卵巢重量（柱狀圖）、卵巢組織切片

【評價結(jié)論】

1、與正常對照組相比， 卵黃蛋白原（VTG）含量減少，雌魚產(chǎn)卵數(shù)減少，子一代表現(xiàn)出發(fā)育毒性，卵巢質(zhì)量下降，成熟卵細(xì)胞比例均降低，提示在本實(shí)驗(yàn)條件下，供試品具有生殖毒性的風(fēng)險(xiǎn)。

【參考文獻(xiàn)】

[1] GBT 35517-2017 化學(xué)品 魚類生殖毒性短期試驗(yàn)方法.

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