感染科吳燕輝醫(yī)生

2025-01-26 21:31 龍巖 | 吳燕輝，畢業(yè)于福建醫(yī)科大學(xué)感染科主治醫(yī)師，學(xué)士學(xué)位，擅長(zhǎng)各種肝炎、肺結(jié)核、艾滋病、發(fā)熱等感染性疾病診治，尤其對(duì)重型肝炎、肝衰竭、肝硬化并發(fā)癥等疾病有較豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，掌握血漿置換術(shù)、雙重血漿分子濾過(guò)吸附術(shù)、雙重腹水超濾濃縮回輸術(shù)等人工肝支持系統(tǒng)技術(shù)。

這種檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、應(yīng)用廣泛。它可以不受場(chǎng)地、規(guī)模的限制，甚至有些朋友在家里就可以操作,就是我們常說(shuō)的快速診斷法。這種技術(shù)的特點(diǎn)，就是非常直觀，任何人經(jīng)過(guò)短期的培訓(xùn)，都可以判斷出正確的結(jié)果。這種快速的診斷方法在一般情況下， 20分鐘就可以做出診斷。我們通過(guò)檢測(cè)血清里的抗體就可以檢測(cè)出是否感染了艾滋病。

用ELISA檢測(cè)P24抗原，在HIV感染早期尚未出現(xiàn)抗體時(shí),血中就有該抗原存在。由于P24量太少，陽(yáng)性率通常較低?，F(xiàn)有用解離免疫復(fù)合物法或濃縮P24抗原，來(lái)提高敏感性。

用PCR法檢測(cè)HIV基因，具有快速、高效、敏感和特異等優(yōu)點(diǎn)，目前該法已被應(yīng)用于HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。

艾滋病檢測(cè)試紙條是使用膠體金免疫層析科技研發(fā)的新-代檢測(cè)試劑。它可檢測(cè)血清或血漿標(biāo)本中的HIV-1/2特有性抗體。所有操作時(shí)間15分鐘，動(dòng)作簡(jiǎn)便、迅速、準(zhǔn)確、自帶質(zhì)控對(duì)照無(wú)需所有附加藥劑。適合個(gè)人檢測(cè)，也適合各大醫(yī)院，疾控中心檢測(cè)。

用這種方法檢測(cè)，敏感性、特異性都非常好。檢測(cè)口腔粘膜滲出液。這也是一種非?？焖?、簡(jiǎn)便的方法。病人是無(wú)創(chuàng)的。這種無(wú)創(chuàng)有如下好處: 一方面被檢測(cè)的人沒有痛苦，另外對(duì)操作的人來(lái)講，也避免了一些職業(yè)暴露，一些操作中的污染。檢測(cè)艾滋病抗體,相當(dāng)于完成了一半，這是一個(gè)初篩實(shí);驗(yàn)，特異性稍微差一點(diǎn)， 因?yàn)樗€需要一個(gè)確診實(shí)驗(yàn)來(lái)確定抗體是否真的存在?艾滋病病毒的抗體，是否存在假陽(yáng)性或交叉免疫的現(xiàn)象。

艾滋病還有一個(gè)窗口期，即從感染HIV到機(jī)體產(chǎn)生抗體的這一段時(shí)間稱之為窗口期，在窗口期檢測(cè)不到抗體，但是體內(nèi)已含有HIV,因此，窗口期同樣具有感染性。窗口期現(xiàn)在也有辦法來(lái)檢測(cè)，就是可以查抗原(病毒的組成部分)，比如查PR10抗原，也可以查病毒的RNA(病毒載量)這種方法都是非常敏感的，可以通過(guò)這些方法,診斷一些窗口期感染的病人。

該方法是初篩實(shí)驗(yàn)室最常用的、也是最主要的檢測(cè)HIV抗體的方法，ELISA法的試劑盒發(fā)展比較迅速目前已發(fā)展到第4代。第1代試劑檢測(cè)HIV抗體試劑，主要用于獻(xiàn)血員的篩查，該試劑的最大缺點(diǎn)是假陽(yáng)性率高，這是由于試劑中含有宿主細(xì)胞成分。第2代試劑以基因工程重組技術(shù)為抗原，包括了P24、gp36、gp41、g120等，能同時(shí)檢測(cè)HIV-1、HIV-2型，特異性較第1代試劑有了很大的提高，檢測(cè)窗口期也比第1代試劑縮短了3周左右。第3代試劑該試劑采用雙抗原夾心法檢測(cè)抗體，能同時(shí)檢測(cè)IgM抗體，試劑盒的靈敏度較第2代試劑有所提高，假陽(yáng)性控制在0.26%左右，檢測(cè)窗口也比第2代檢測(cè)方法縮短了1周左右，該試劑是目前初篩實(shí)驗(yàn)室最常用的試劑盒。第4代試劑在第3代試劑盒的基礎(chǔ)上增加了P24抗原的檢測(cè)，主要的優(yōu)缺點(diǎn)如下：1）優(yōu)點(diǎn)：此方法提高了試劑的敏感度，縮短了感染窗口期，較3代試劑縮短了4天左右的窗口期，減少了窗口期漏檢的概率。2）缺點(diǎn)：由于抗原核抗體同時(shí)包被在反應(yīng)板上，存在相互干擾的可能，影響了免疫反應(yīng)的特異性。單從檢測(cè)抗體的角度出發(fā)第4代試劑檢測(cè)P24抗原敏感度最低為20pg/ml，而第3代單獨(dú)檢測(cè)抗體分析法敏感度最低可達(dá)3.5pg/ml。因此在初篩實(shí)驗(yàn)室第4代試劑想完全取代第3代試劑尚需進(jìn)一步提高試劑盒的檢出敏感度。

該方法是通過(guò)包被HIV 抗原的顆粒凝集來(lái)檢測(cè) HIV 抗體是否存在的一種方法，血清中的抗體與試劑中顆粒載體上的 HIV抗原結(jié)合帶動(dòng)載體顆粒的凝集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。該方法適合簡(jiǎn)便快速篩選，由于敏感度和特異性較低，在獻(xiàn)血及大型醫(yī)院不作為常規(guī)檢測(cè)方法。

將硝酸纖維膜作為固相載體，將 HIV 抗原包被在膜上，當(dāng)被檢測(cè)血清中含有HIV 抗體時(shí)即可與抗原結(jié)合，然后結(jié)合物與酶標(biāo)記抗人免疫球蛋白結(jié)合，在底物的參與下可在膜上形成肉眼可見的著色斑點(diǎn)。由于該試劑需要洗滌、加底物等，所以完成一個(gè)檢測(cè)需要時(shí)間較長(zhǎng)，試劑價(jià)格高，使用者較少。

該技術(shù)與免疫斑點(diǎn)技術(shù)相似均采用了硝酸纖維膜，該方法是在纖維膜條的上方和下方均置入膠體金標(biāo)記的基因重組 HIV -1/2 抗原，檢測(cè)被檢血清中無(wú) HIV - 1/2 抗體。該方法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)相比敏感度遠(yuǎn)不及，但該方法試劑盒常溫保存，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，肉眼可觀測(cè)無(wú)需特殊檢測(cè)儀器，在基層實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用廣泛。

該方法是將感染HIV的細(xì)胞作為HIV抗原固定在玻片上，將被檢測(cè)者的血清加入玻片，如被檢測(cè)者血清中含有HIV抗體，則可以固定的抗原形成抗原抗體復(fù)合物。進(jìn)一步加入熒光標(biāo)記的抗人IgG，使抗原抗體復(fù)合物著色，通過(guò)熒光顯微鏡可觀測(cè)到著色的細(xì)胞，此時(shí)即可斷定被檢者血中是否存在HIV抗體。

此方法操作簡(jiǎn)單，敏感度和特異性較ELISA要高，但也存在不足，很多在著色過(guò)程中存在非特異性的熒光著色難以去除，在判斷結(jié)果時(shí)需要有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)師才能區(qū)分，同時(shí)該檢測(cè)需要高倍熒光顯微鏡。

本方法敏感度和特異性均較高，但因試劑制備復(fù)雜、成本高，且放射性核素對(duì)人體及環(huán)境有嚴(yán)重的危害，對(duì)操作者要有嚴(yán)格的防護(hù)，對(duì)檢測(cè)后的殘物垃圾要深埋處理。

該方法是我國(guó)衛(wèi)生部頒布的《艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》中唯一的HIV感染確診實(shí)驗(yàn)方法，該方法常用來(lái)甄別其他HIV檢測(cè)試劑盒的“優(yōu)劣性”的金標(biāo)準(zhǔn)，免疫印跡法的特異性和敏感度較ELISA要高很多，其假陽(yáng)性率<1/10000，假陰性更低，約為1/25萬(wàn)。

該方法是目前最特異、最敏感的證實(shí)HIV感染的方法，也是目前國(guó)內(nèi)HIV確診試驗(yàn)的首選方法。該方法檢測(cè)時(shí)實(shí)驗(yàn)操作一定要按嚴(yán)格要求，文獻(xiàn)報(bào)道不當(dāng)?shù)牟僮骺墒辜訇?yáng)性率超過(guò)2%。

檢測(cè)HIV-1p24抗原檢測(cè)是HIV-1診斷過(guò)程中的輔助診斷，目前采用ELISA雙抗體夾心法測(cè)定被檢患者血液中P24蛋白，此方法敏感度差，只作為HIV的輔助診斷，不能依次確診，主要是用于初篩時(shí)HIV陽(yáng)性，確認(rèn)試驗(yàn)陰性時(shí)的一種輔助診斷。

主要包括反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Re-al-timePCR)等。既往HIV-1病毒載量檢測(cè)主要用于監(jiān)測(cè)抗病毒治療的效果，或輔助HIV感染診斷。2015年的《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》明確提出使用病毒載量檢測(cè)作為補(bǔ)充試驗(yàn)的策略，對(duì)于篩查試驗(yàn)有反應(yīng)者建議核酸檢測(cè)或2-4周后復(fù)查。在2018年的《中國(guó)艾滋病診療指南》和2019年的《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中明確提出對(duì)于成人、青少年及18月齡以上兒童，HIV抗體篩查試驗(yàn)有反應(yīng)和血漿病毒載量大于5000拷貝/mL時(shí)，即可診斷HIV感染。

核酸檢測(cè)作為補(bǔ)充試驗(yàn)策略，可極大提高HIV-1抗體不確定樣本的診斷率及診斷效率，縮短診斷周期，使感染者及早獲得治療。

CD4細(xì)胞檢測(cè)是判斷HIV感染者免疫狀況、臨床分期，評(píng)價(jià)抗病毒藥物治療效果的重要指標(biāo)。主要包括：一是流式細(xì)胞儀測(cè)定法，包括雙平臺(tái)法（DPT）和單平臺(tái)法（SPT），另一類是非流式細(xì)胞儀測(cè)定法，如基于成像技術(shù)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。

HIV耐藥是指病毒因發(fā)生變異而對(duì)某種藥物敏感性降低。耐藥變異株的出現(xiàn)源于HIV的快速?gòu)?fù)制更新和HIV反轉(zhuǎn)錄酶的高錯(cuò)配率，導(dǎo)致高突變率和新病毒株不斷產(chǎn)生。在抗病毒藥物存在的情況下，耐藥毒株被藥物選擇成為優(yōu)勢(shì)株。

HIV耐藥檢測(cè)方法可分為基因型檢測(cè)和表型檢測(cè)，主要是對(duì)耐藥相關(guān)基因突變的檢測(cè)，檢測(cè)病毒基因的pol區(qū)是否存在與抗反轉(zhuǎn)錄病毒藥物（如蛋白酶抑制劑、反轉(zhuǎn)錄酶抑制）易感性降低相關(guān)的突變，并利用耐藥基因型解釋系統(tǒng)判斷是否耐藥以及耐藥程度，其對(duì)于抗病毒治療具有重要指導(dǎo)意義。

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