感染科吳燕輝醫(yī)生

2025-01-26 21:31 龍巖 | 吳燕輝，畢業(yè)于福建醫(yī)科大學感染科主治醫(yī)師，學士學位，擅長各種肝炎、肺結核、艾滋病、發(fā)熱等感染性疾病診治，尤其對重型肝炎、肝衰竭、肝硬化并發(fā)癥等疾病有較豐富的臨床經驗，掌握血漿置換術、雙重血漿分子濾過吸附術、雙重腹水超濾濃縮回輸術等人工肝支持系統技術。

這種檢測方法簡單、應用廣泛。它可以不受場地、規(guī)模的限制，甚至有些朋友在家里就可以操作,就是我們常說的快速診斷法。這種技術的特點，就是非常直觀，任何人經過短期的培訓，都可以判斷出正確的結果。這種快速的診斷方法在一般情況下， 20分鐘就可以做出診斷。我們通過檢測血清里的抗體就可以檢測出是否感染了艾滋病。

用ELISA檢測P24抗原，在HIV感染早期尚未出現抗體時,血中就有該抗原存在。由于P24量太少，陽性率通常較低?，F有用解離免疫復合物法或濃縮P24抗原，來提高敏感性。

用PCR法檢測HIV基因，具有快速、高效、敏感和特異等優(yōu)點，目前該法已被應用于HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。

艾滋病檢測試紙條是使用膠體金免疫層析科技研發(fā)的新-代檢測試劑。它可檢測血清或血漿標本中的HIV-1/2特有性抗體。所有操作時間15分鐘，動作簡便、迅速、準確、自帶質控對照無需所有附加藥劑。適合個人檢測，也適合各大醫(yī)院，疾控中心檢測。

用這種方法檢測，敏感性、特異性都非常好。檢測口腔粘膜滲出液。這也是一種非常快速、簡便的方法。病人是無創(chuàng)的。這種無創(chuàng)有如下好處: 一方面被檢測的人沒有痛苦，另外對操作的人來講，也避免了一些職業(yè)暴露，一些操作中的污染。檢測艾滋病抗體,相當于完成了一半，這是一個初篩實;驗，特異性稍微差一點， 因為它還需要一個確診實驗來確定抗體是否真的存在?艾滋病病毒的抗體，是否存在假陽性或交叉免疫的現象。

艾滋病還有一個窗口期，即從感染HIV到機體產生抗體的這一段時間稱之為窗口期，在窗口期檢測不到抗體，但是體內已含有HIV,因此，窗口期同樣具有感染性。窗口期現在也有辦法來檢測，就是可以查抗原(病毒的組成部分)，比如查PR10抗原，也可以查病毒的RNA(病毒載量)這種方法都是非常敏感的，可以通過這些方法,診斷一些窗口期感染的病人。

該方法是初篩實驗室最常用的、也是最主要的檢測HIV抗體的方法，ELISA法的試劑盒發(fā)展比較迅速目前已發(fā)展到第4代。第1代試劑檢測HIV抗體試劑，主要用于獻血員的篩查，該試劑的最大缺點是假陽性率高，這是由于試劑中含有宿主細胞成分。第2代試劑以基因工程重組技術為抗原，包括了P24、gp36、gp41、g120等，能同時檢測HIV-1、HIV-2型，特異性較第1代試劑有了很大的提高，檢測窗口期也比第1代試劑縮短了3周左右。第3代試劑該試劑采用雙抗原夾心法檢測抗體，能同時檢測IgM抗體，試劑盒的靈敏度較第2代試劑有所提高，假陽性控制在0.26%左右，檢測窗口也比第2代檢測方法縮短了1周左右，該試劑是目前初篩實驗室最常用的試劑盒。第4代試劑在第3代試劑盒的基礎上增加了P24抗原的檢測，主要的優(yōu)缺點如下：1）優(yōu)點：此方法提高了試劑的敏感度，縮短了感染窗口期，較3代試劑縮短了4天左右的窗口期，減少了窗口期漏檢的概率。2）缺點：由于抗原核抗體同時包被在反應板上，存在相互干擾的可能，影響了免疫反應的特異性。單從檢測抗體的角度出發(fā)第4代試劑檢測P24抗原敏感度最低為20pg/ml，而第3代單獨檢測抗體分析法敏感度最低可達3.5pg/ml。因此在初篩實驗室第4代試劑想完全取代第3代試劑尚需進一步提高試劑盒的檢出敏感度。

該方法是通過包被HIV 抗原的顆粒凝集來檢測 HIV 抗體是否存在的一種方法，血清中的抗體與試劑中顆粒載體上的 HIV抗原結合帶動載體顆粒的凝集，出現肉眼可見的凝集現象。該方法適合簡便快速篩選，由于敏感度和特異性較低，在獻血及大型醫(yī)院不作為常規(guī)檢測方法。

將硝酸纖維膜作為固相載體，將 HIV 抗原包被在膜上，當被檢測血清中含有HIV 抗體時即可與抗原結合，然后結合物與酶標記抗人免疫球蛋白結合，在底物的參與下可在膜上形成肉眼可見的著色斑點。由于該試劑需要洗滌、加底物等，所以完成一個檢測需要時間較長，試劑價格高，使用者較少。

該技術與免疫斑點技術相似均采用了硝酸纖維膜，該方法是在纖維膜條的上方和下方均置入膠體金標記的基因重組 HIV -1/2 抗原，檢測被檢血清中無 HIV - 1/2 抗體。該方法與酶聯免疫吸附試驗相比敏感度遠不及，但該方法試劑盒常溫保存，實驗操作簡單，肉眼可觀測無需特殊檢測儀器，在基層實驗室的應用廣泛。

該方法是將感染HIV的細胞作為HIV抗原固定在玻片上，將被檢測者的血清加入玻片，如被檢測者血清中含有HIV抗體，則可以固定的抗原形成抗原抗體復合物。進一步加入熒光標記的抗人IgG，使抗原抗體復合物著色，通過熒光顯微鏡可觀測到著色的細胞，此時即可斷定被檢者血中是否存在HIV抗體。

此方法操作簡單，敏感度和特異性較ELISA要高，但也存在不足，很多在著色過程中存在非特異性的熒光著色難以去除，在判斷結果時需要有經驗的檢驗師才能區(qū)分，同時該檢測需要高倍熒光顯微鏡。

本方法敏感度和特異性均較高，但因試劑制備復雜、成本高，且放射性核素對人體及環(huán)境有嚴重的危害，對操作者要有嚴格的防護，對檢測后的殘物垃圾要深埋處理。

該方法是我國衛(wèi)生部頒布的《艾滋病檢測技術規(guī)范》中唯一的HIV感染確診實驗方法，該方法常用來甄別其他HIV檢測試劑盒的“優(yōu)劣性”的金標準，免疫印跡法的特異性和敏感度較ELISA要高很多，其假陽性率<1/10000，假陰性更低，約為1/25萬。

該方法是目前最特異、最敏感的證實HIV感染的方法，也是目前國內HIV確診試驗的首選方法。該方法檢測時實驗操作一定要按嚴格要求，文獻報道不當的操作可使假陽性率超過2%。

檢測HIV-1p24抗原檢測是HIV-1診斷過程中的輔助診斷，目前采用ELISA雙抗體夾心法測定被檢患者血液中P24蛋白，此方法敏感度差，只作為HIV的輔助診斷，不能依次確診，主要是用于初篩時HIV陽性，確認試驗陰性時的一種輔助診斷。

主要包括反轉錄PCR(RT-PCR)、實時熒光定量PCR(Re-al-timePCR)等。既往HIV-1病毒載量檢測主要用于監(jiān)測抗病毒治療的效果，或輔助HIV感染診斷。2015年的《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》明確提出使用病毒載量檢測作為補充試驗的策略，對于篩查試驗有反應者建議核酸檢測或2-4周后復查。在2018年的《中國艾滋病診療指南》和2019年的《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》行業(yè)標準中明確提出對于成人、青少年及18月齡以上兒童，HIV抗體篩查試驗有反應和血漿病毒載量大于5000拷貝/mL時，即可診斷HIV感染。

核酸檢測作為補充試驗策略，可極大提高HIV-1抗體不確定樣本的診斷率及診斷效率，縮短診斷周期，使感染者及早獲得治療。

CD4細胞檢測是判斷HIV感染者免疫狀況、臨床分期，評價抗病毒藥物治療效果的重要指標。主要包括：一是流式細胞儀測定法，包括雙平臺法（DPT）和單平臺法（SPT），另一類是非流式細胞儀測定法，如基于成像技術的細胞計數儀。

HIV耐藥是指病毒因發(fā)生變異而對某種藥物敏感性降低。耐藥變異株的出現源于HIV的快速復制更新和HIV反轉錄酶的高錯配率，導致高突變率和新病毒株不斷產生。在抗病毒藥物存在的情況下，耐藥毒株被藥物選擇成為優(yōu)勢株。

HIV耐藥檢測方法可分為基因型檢測和表型檢測，主要是對耐藥相關基因突變的檢測，檢測病毒基因的pol區(qū)是否存在與抗反轉錄病毒藥物（如蛋白酶抑制劑、反轉錄酶抑制）易感性降低相關的突變，并利用耐藥基因型解釋系統判斷是否耐藥以及耐藥程度，其對于抗病毒治療具有重要指導意義。

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