“吸血鬼”日記:科研人必知的血液樣本采集與處理全攻略
作為連接基礎(chǔ)科學(xué)與臨床應(yīng)用的橋梁,血液分析為科研人們提供了探索疾病機(jī)制、監(jiān)測治療效果的窗口。然而,血液樣本的采集、處理和儲存過程中的微小差異,都可能導(dǎo)致研究結(jié)果的巨大偏差。為了確保研究的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,我們有必要深入理解并掌握血液樣本的正確處理方法。在這里,小編將細(xì)致展開血液樣本的采集和處理流程,包括但不限于采血管的選擇、抗凝劑的使用、樣本的分離、儲存條件等關(guān)鍵步驟。
一、血液樣本基礎(chǔ)知識
全血
將血液采集到含有抗凝劑的采血管中所形成的混合物,包括血細(xì)胞(如紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板等)和血漿的所有成分。
血漿與血清
在采集血液樣本時,科研人員必須明確區(qū)分血漿和血清。兩者均為血液的液體部分,但在成分和制備方法上存在顯著差異。
血漿
定義:全血經(jīng)抗凝處理后,通過離心獲得的不含細(xì)胞成分的淡黃色透明液體。
成分:主要包括水(約90%)、蛋白質(zhì)(如白蛋白、免疫球蛋白、纖維蛋白原等)、電解質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)、激素和廢物。
特點(diǎn):含有纖維蛋白原和凝血因子。
血清
定義:全血凝固后,離心分離出來的淡黃色透明液體。
成分:與血漿成分相似,但不含纖維蛋白原和凝血因子。
特點(diǎn):纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,形成血凝塊,血清則為血凝塊形成后剩余的液體部分。
二、采血管的選擇
根據(jù)試驗(yàn)需求選擇采血管類型:
三、樣本的采集
樣本采集
血液采集需通過倫理審查。采樣前準(zhǔn)備好采血所需材料和設(shè)備,并確保所有材料和設(shè)備都是無菌,可以隨時使用。
血清
使用血清管采集靜脈血樣本,采集后立即輕輕顛倒搖勻5-8次,使促凝劑和血樣充分混勻,促進(jìn)血液凝固。保持標(biāo)本管垂直、管口向上放置。樣本于室溫(22-25℃)中靜置30-60 min,待血液完全凝固。
血漿
使用含有抗凝劑的血漿收集管采集靜脈樣本,采集后立即輕輕顛倒搖勻5-8次,確??鼓齽┖脱獦映浞只靹颉13謽?biāo)本管垂直、管口向上放置。
注:收集的全血需盡快處理成血清/血漿;若不能及時處理,放置于2℃-6℃保存,保存時間不易超過35d。
注意事項
血液采集時,應(yīng)避免溶血現(xiàn)象,采集時應(yīng)注意:靜脈采血時,抽血速度不易過快;一次性采血量不宜過少;采集的全血不宜激烈振蕩;離心轉(zhuǎn)速不宜過大。
樣本離心
血清樣本在室溫靜置30-60min后可離心分離,血漿于收集后可立即離心分離出血漿。
離心條件:在1200g下,4℃下離心10min,小心收集上層淡黃色透明溶液,避免擾動紅細(xì)胞和白細(xì)胞層。
將收集的血漿/血清按需分裝,在-20℃或-80℃下儲存。
溶血樣本
樣本儲存
全血
儲存溫度:2℃-8℃;保存期:<48h
全血不能凍融;
已分離的血清/血漿,在室溫條件保存不宜超過8h;如果試驗(yàn)在8h內(nèi)不能完成,血清/血漿應(yīng)轉(zhuǎn)入2℃-8℃保存。
蛋白質(zhì)組學(xué)樣本
溫度條件:
短期儲存:若存放于4℃,請勿超過一個月。
長期儲存:血清/血漿應(yīng)保存在-20℃或-80℃溫度下。長時間儲存在2-8℃可能導(dǎo)致血清中的各種蛋白和脂蛋白聚集而形成沉淀或可見的混濁。
避光儲存:血清/血漿應(yīng)避免暴露在陽光直接照射下,以防止光照對樣品造成不良影響。
冷凍狀態(tài)解凍時,應(yīng)先將血清置于2-8℃冰箱融解,然后在室溫下全融。注意解凍過程中避免直接由-20℃或-80℃直接至室溫下解凍,因?yàn)闇囟雀淖兲笕菀自斐傻鞍踪|(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。同時,應(yīng)避免反復(fù)凍融,因?yàn)榉磸?fù)凍融會破壞血清中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。
代謝組學(xué)樣本
溫度條件:
短期儲存:若存放于2-8℃條件下,請勿超過一個月,以避免代謝物發(fā)生變化。
長期儲存:血清/血漿應(yīng)保存在-80℃的低溫條件下,以維持代謝物的穩(wěn)定性。使用-80℃冰箱或液氮罐等設(shè)備可以確保樣本在長時間的儲存中保持穩(wěn)定。
避光儲存:血清/血漿應(yīng)避免暴露在陽光直接照射下,以防止光照對樣本造成不良影響。
從冷凍狀態(tài)解凍時,應(yīng)先將血清/血漿置于2-8℃冰箱或冰上緩慢進(jìn)行。注意解凍過程中避免直接由-80℃直接至室溫下解凍,因?yàn)闇囟雀淖兲笕菀自斐纱x物發(fā)生變化。
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