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一種具有抗敏功效的番石榴葉提取物的制備方法與流程

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2024年12月12日 06:13

本發(fā)明涉及化妝品技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種具有抗敏功效的番石榴葉提取物的制備方法。

背景技術(shù)

番石榴葉為桃金娘科植物番石榴(psidiumguajavalinn.)的干燥葉及帶葉嫩莖，在美洲以及亞洲的亞熱帶地區(qū)與熱帶地區(qū)分布廣泛，我國的福建、廣西、廣州等地區(qū)有較大的種植面積。番石榴葉中富含的三萜、黃酮、多酚等化學(xué)組分具有抗氧化、抗菌等藥理作用，在化妝品行業(yè)有廣泛的應(yīng)用前景和重要的商業(yè)價值。林燕如等采用水提法與醇提法并利用微波前處理對番石榴葉中的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行提取，提取物中黃酮含量為9.91%。楠極等研究了微波輔助提取法對番石榴葉多酚進(jìn)行，提取物中多酚含量量為1.41%。謝郁峰等研究了超聲提取法對番石榴葉中的總?cè)七M(jìn)行提取，提取物中總?cè)坪繛?.93%。

近年來，生物技術(shù)被廣泛的應(yīng)用于天然物質(zhì)的提取中，如廣泛應(yīng)用于黃酮類化合物的提取實驗中的酶解法，可以應(yīng)用于被細(xì)胞壁包圍不易提取的原料，原理是充分破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，提高所需提取物的浸出率，提取過程一般都采用乙醇為溶劑。但是每種植物的細(xì)胞壁各有不同，不同的酶可以酶解的植物細(xì)胞壁也各有不同，尤其是酶解效率相差很大。如果能尋找到一種酶解效率高，提取路徑環(huán)保的番石榴葉提取方法，必將帶來較大經(jīng)濟(jì)效益。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供一種具有抗敏功效的番石榴葉提取物的制備方法，該制備方法具有提取率高，提取路徑環(huán)保的優(yōu)點，該方法制備的番石榴葉提取物具有較好的抗敏功效。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種具有抗敏功效的番石榴葉提取物的制備方法，其特征在于：采用以下步驟：

a、選取新鮮番石榴葉，洗凈后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后進(jìn)行粉碎，過60~80目篩，得番石榴葉粉；

b、將步驟a所得番石榴葉粉加去離子水制備成質(zhì)量份數(shù)為6~10%的勻漿液，按每克番石榴葉粉添加0.2~1.0g復(fù)合酶的比例進(jìn)行酶解處理，酶解溫度為55~70℃，ph值為3.5~6.5，酶解6~8小時，得酶解液；所述復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶按照質(zhì)量比2:1:1配置而成；

c、將步驟b所得酶解液加入萃取釜，設(shè)置萃取釜內(nèi)壓力為0.8~1.2mpa，萃取溫度為120℃~220℃，萃取時間為30min~60min，萃取劑為純凈水，所述酶解液與萃取劑的質(zhì)量比為1:1-3，萃取完成得具有抗敏功效的番石榴葉提取物。

現(xiàn)有番石榴葉提取技術(shù)，基本上都是采用乙醇為萃取劑，而本發(fā)明優(yōu)選纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶組合成復(fù)合酶，先對番石榴葉粉進(jìn)行酶解，酶解后可以使用純凈水亞臨界提取，具有提取效率高、提取路徑環(huán)保等優(yōu)點，且本發(fā)明制備的番石榴葉提取物具有抗敏功效。

所述番石榴葉均采摘自廣西壯族自治區(qū)，為桃金娘科植物番石榴psidiumguajaval.的干燥葉。

所述真空干燥箱為dzf-1型立式真空干燥箱，生產(chǎn)商為北京林茂科技公司。

所述纖維素酶和果膠酶均購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司，酶活力分別為40000u/g和50000u/g。

所述中性蛋白酶酶購自武漢創(chuàng)新化工有限公司，酶活力為30000u/g。

所述亞臨界提取設(shè)備為cbe-5l亞臨界流體提取試驗裝置，生產(chǎn)商為河南省亞臨界生物技術(shù)有限公司。

亞臨界水(subcriticalwater，sw)，指在一定壓力下，溫度介于100~374℃之間的凝聚態(tài)水，也稱之為高溫水、超加熱水、高壓熱水或熱液態(tài)水。亞臨界水的物理、化學(xué)特性與常溫常壓下的水有較大差別，隨著溫度的升高，水的極性、表面張力和黏度都急劇下降，對中極性和非極性化合物的溶解能力會大大增加，其性質(zhì)更接近于有機(jī)溶劑。因此，通過調(diào)節(jié)亞臨界水的溫度和壓力，使水的極性在較大范圍內(nèi)變化，就可以選擇性地提取不同種類的植物有效成分，也可以實現(xiàn)植物有效成分從水溶性成分到脂溶性成分的連續(xù)提取，在提取時既可作為溶劑，也可作為催化劑。

本發(fā)明采用先酶解植物細(xì)胞壁，然后用亞臨界水提取番石榴葉中有效成分，所得番石榴葉提取物具有皮膚抗敏功效，同時具有提取效率高，提取路徑環(huán)保等優(yōu)點。

本發(fā)明實施例1-5所制備番石榴葉提取物的總?cè)?、總黃酮、總多酚的含量測定。

1、總?cè)坪康臏y定

將本發(fā)明所得的番石榴葉提取物以齊墩果酸為對照品，用紫外分光光度計測量提取物中總?cè)频暮?，檢測波長為540±1nm。按齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算提取物中總?cè)频暮?。番石榴葉提取物中總?cè)频淖贤馕請D譜見圖1。

2、總黃酮含量的測定

用高效液相色譜法（hplc）測定本發(fā)明所得的番石榴葉提取物中總黃酮的含量，hplc色譜條件為：色譜柱為inertsilods-sp（250mm×4.6mm，5μm），柱溫為室溫，檢測波長為360nm，流動相a為0.2%的乙酸水溶液，流動相b為甲醇，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量為20μl。番石榴葉提取物的hplc譜圖見圖2。

3、總多酚含量的測定

采用folin-ciocalteu法測定總多酚的含量。按照沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算本發(fā)明所得的番石榴葉提取物中總多酚的含量。番石榴葉提取物中總多酚的紫外吸收圖譜見圖3。

經(jīng)計算分析得番石榴葉提取物中實施例1-5所制備番石榴葉提取物的總?cè)?、總黃酮、總多酚的含量見表1：

表1番石榴葉提取物中總?cè)?、總黃酮和總多酚的含量

2、本發(fā)明所制備番石榴葉提取物的抗敏功效測定實驗

健康昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重為18g~22g，試驗組、模型對照組及空白對照組每組10只，分組情況如表2所示。用8%的硫化鈉酒精溶液給小鼠的背部脫毛（2cm×3cm），將番石榴葉提取物涂布于脫毛區(qū)皮膚上，每天1次，連續(xù)涂抹7天，模型對照組及空白對照組涂布等量純凈水。末次涂抹50min后于頸背部相同涂抹部位的皮下注射4-氨基吡啶（生理鹽水配成0.02%）溶液0.01ml/g，空白對照組則注射生理鹽水。記錄各組在15min內(nèi)的舔體次數(shù)（以連續(xù)舔體至出現(xiàn)短暫停頓，作舔體1次計算）。

表2小鼠分組情況

表3涂抹不同乳液對皮膚瘙癢模型舔體次數(shù)的影響

與空白對照組相比，模型對照組的小鼠舔體次數(shù)明顯增加。實施例3所制備番石榴葉提取物能明顯減少因4-氨基吡啶誘導(dǎo)引起的皮膚瘙癢模型的舔體次數(shù)，測試數(shù)據(jù)見表3。從以上的分析可知，本發(fā)明所獲得的番石榴葉提取物具有很好的抗敏效果。

綜上所述，本發(fā)明具有提取效率高、提取路徑環(huán)保無污染，所得番石榴葉提取物具有很好的抗敏效果等優(yōu)點。

附圖說明

圖1為番石榴葉提取物中總?cè)频淖贤馕請D譜；

圖2為番石榴葉提取物中總黃酮的hplc譜圖；

圖3為番石榴葉提取物中總多酚的紫外吸收圖譜。

其中圖1的縱坐標(biāo)為波長，橫坐標(biāo)為吸光度；圖2的縱坐標(biāo)為發(fā)光強(qiáng)度，橫坐標(biāo)為時間；圖3的縱坐標(biāo)為波長，橫坐標(biāo)為吸光度。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于以下實施例。

實施例1：

一種具有抗敏功效的番石榴葉提取物的制備方法，采用以下步驟：