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目錄

第一章 引言

1．IGF研究歷史及IGF信號途徑介紹

1．1 IGF-1的發(fā)現(xiàn)

1．2 IGF信號通路的組成

1．3 IGF配體

1．4 受體IR和IGF-R

1．5 IGF結(jié)合蛋白

1．6 GH-IGF內(nèi)分泌生長調(diào)控軸

1．7 IGF-1的合成和體內(nèi)循環(huán)

2．IGF-1的功能研究

2．1 IGF1-1對生長影響的研究

2．2 IGF-1對肌肉增殖的影響

2．3 IGF-1對代謝的影響

2．4 IGF-1對生殖的影響

2．5 IGF-1對衰老的影響

2．6 IGF-1的其他功能及臨床應(yīng)用

3．硬骨魚類IGF信號途徑

3．1 斑馬魚IGF信號途徑的組成及序列分析

3．2 魚類IGF-1系統(tǒng)功能總結(jié)

4．鯽魚作為研究材料的優(yōu)點

第二章 材料和方法

1．主要儀器與設(shè)備

2．主要試劑和試劑盒

2．1 培養(yǎng)基和常用試劑及其配制

2．2 主要分子生物學(xué)試劑

2．3 蛋白實驗試劑及抗體

2．4 試劑盒

3．實驗材料

3．1 載體及菌株

3．2 實驗用魚的養(yǎng)殖和管理

4．主要實驗技術(shù)和方法

4．1 感受態(tài)細胞制備

4．2 基因組提取

4．3 總RNA提取(Trizol法)

4．4 cDNA合成

4．5 PCR產(chǎn)物膠回收

4．6 RNA探針制備

4．7 整體原位雜交(Whole Mount In Situ Hybridization)

4．8 組織切片及蘇木精-伊紅(HE)染色

4．9 免疫組織化學(xué)和免疫熒光技術(shù)

4．10 總蛋白提取及蛋白濃度測定

4．11 蛋白電泳及蛋白印跡檢測

4．12 轉(zhuǎn)錄組測序

5．實驗過程

5．1 IGF-1轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建

5．2 顯微注射及表型觀察

5．3 轉(zhuǎn)基因魚篩選

5．4 生長指標(biāo)評估以及肌肉組織的病理切片分析

5．5 組織切片及免疫組化

5．6 轉(zhuǎn)錄組分析

5．7 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測

5．8 實時定量熒光PCR

5．9 基礎(chǔ)代謝實驗

5．10 肌肉組織中氨基酸含量檢測

5．11 肌肉組織中脂肪及ATP含量

5．12 其他組織切片及觀察

第三章 實驗結(jié)果及分析

1．斑馬魚FO高表達IGF-1的表型

2．轉(zhuǎn)基因鯽魚的獲得與表型

3．轉(zhuǎn)基因鯽魚組織病理與相關(guān)分析

3．1 組織病理切片分析

3．2 肌肉組織免疫組織化學(xué)

3．3 轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析

3．4 實時熒光定量PCR

3．5 蛋白印跡雜交

3．6 基礎(chǔ)代謝實驗

3．7 肌肉組織中游離氨基酸(BCAAs)檢測

3．8 肌肉組織中的脂肪及ATP檢測

3．9 IGF-1高表達對生殖系統(tǒng)的影響

第四章 討論

參考文獻

附錄

聲明

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網(wǎng)址: 魚類胰島素樣生長因子1(IGF http://www.u1s5d6.cn/newsview117713.html