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細菌生長曲線

來源：泰然健康網(wǎng) 時間：2024年12月06日 06:09

細菌生長曲線

以時間為橫坐標，以活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標，可得出一條生長曲線，曲線顯示了細菌的生長繁殖的4個時期：遲緩期，對數(shù)期，穩(wěn)定期，衰亡期。 [1]

遲緩期

遲緩期（lag phase）：又叫調(diào)整期。細菌接種至培養(yǎng)基后，對新環(huán)境有一個短暫適應過程（不適應者可因轉(zhuǎn)種而死亡）。此期曲線平坦穩(wěn)定，因為細菌繁殖極少。遲緩期長短因素種、接種菌量、菌齡以及營養(yǎng)物質(zhì)等不同而異，一般為1～4小時。此期中細菌體積增大，代謝活躍，為細菌的分裂增殖合成、儲備充足的酶、能量及中間代謝產(chǎn)物。生物制藥中常通過加入酶激活劑如鎂離子等縮短遲緩期。 [1]

對數(shù)期

對數(shù)期（logarithmic phase）：又稱指數(shù)期。此期生長曲線上活菌數(shù)直線上升。細菌以穩(wěn)定的幾何級數(shù)極快增長，可持續(xù)幾小時至幾天不等（視培養(yǎng)條件及細菌代時而異）。此期細菌形態(tài)、染色、生物活性都很典型，對外界環(huán)境因素的作用敏感，因此研究細菌性狀以此期細菌最好。抗生素作用，對該時期的細菌效果最佳。

穩(wěn)定期

穩(wěn)定期（stationary phase）：該期的生長菌群總數(shù)處于平坦階段，但細菌群體活力變化較大。由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)消耗、毒性產(chǎn)物（有機酸、H2O2等）積累pH下降等不利因素的影響，細菌繁殖速度漸趨下降，相對細菌死亡數(shù)開始逐漸增加，此期細菌增殖數(shù)與死亡數(shù)漸趨平衡。細菌形態(tài)、染色、生物活性可出現(xiàn)改變，并產(chǎn)生相應的代謝產(chǎn)物如外毒素、內(nèi)毒素、抗生素、以及芽胞等。 [1]

衰亡期

衰亡期（decline phase）：隨著穩(wěn)定期發(fā)展，細菌繁殖越來越慢，死亡菌數(shù)明顯增多?；罹鷶?shù)與培養(yǎng)時間呈反比關系，此期細菌變長腫脹或畸形衰變，甚至菌體自溶，難以辨認其形。生理代謝活動趨于停滯。故陳舊培養(yǎng)物上難以鑒別細菌。

體內(nèi)及自然界細菌的生長繁殖受機體免疫因素和環(huán)境因素的多方面影響，不會出現(xiàn)象培養(yǎng)基中那樣典型的生長曲線。掌握細菌生長規(guī)律，可有目的地研究控制病原菌的生長，發(fā)現(xiàn)和培養(yǎng)對人類有用的細菌。 [1]

測定原理

將細菌接種到一只具有側壁試管的三角燒瓶內(nèi)的培養(yǎng)液中，在適宜的培養(yǎng)溫度和良好的通氣狀態(tài)下，定時取出此三角燒瓶，用"721"分光光度計測定菌濃度（光密度值，OD值），并將所得結果與相對應的培養(yǎng)時間繪制出坐標圖，就可獲得該菌的生長曲線。此測定法的優(yōu)點是不改變菌液體積并用同一培養(yǎng)容器的正常生長條件下，連續(xù)讀取OD值，故不但可測出細菌生長曲線，還可比較同一菌株在不同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下的生長規(guī)律。 [2]

測定步驟

（1）菌液培養(yǎng)：在菌株的斜面培養(yǎng)物上挑取一環(huán)菌苔，接種千肉湯培養(yǎng)基中，3TC靜止培養(yǎng)12h左右，此菌液即為種子培養(yǎng)液。 [3]

（2）分裝培養(yǎng)液及校正零點：用無菌移液管吸取25mL培養(yǎng)基加至有側臂試管的三角燒瓶中。將未接種的培養(yǎng)液傾入其側臂試管中，并在光電比色計上調(diào)節(jié)零點。即使光電比色計上的OD值在零點上。 [3]

（3）接種及零時測定：用移液吸管吸取2.SmL種子培養(yǎng)液接種瓶中，并充分搖勻。將剛接種的培養(yǎng)液傾入側臂試管中，測定光電比色計OD值。此時的讀數(shù)為接種后菌種生長曲線中的零時讀數(shù)值（即接種拭）。

（4）培養(yǎng)及生長量測定將零時測定后的三角燒瓶立即放入恒溫水浴搖床上震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為3TC，搖床的頻率為100次/min 左右（溫度和頻率可隨時調(diào)節(jié)）。在培養(yǎng)中，應每隔30min從搖床上取下三角燒瓶，將菌液傾入側臂試管中，并在光電比色計上讀取OD值。記錄每次所測得的數(shù)據(jù)。在每次測定時，均要用空白對照管的培養(yǎng)液來校正光電比色計的零點。

（5）繪制生長曲線：以測定的時間為橫坐標，菌數(shù)的對數(shù)（OD值）為縱坐標，在半對數(shù)坐標紙上描點繪圖，所得的曲線即為被測蔭在實驗條件下的生長曲線。 [2]

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