艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(HIV) 引起的一種傳染病，目前中國艾滋病的感染呈蔓延和增加的趨勢，談“艾”色變早已成為大家對艾滋病的態(tài)度，因此如何早期發(fā)現和診斷HIV感染對預防HIV傳播、控制AIDS的發(fā)展至關重要。

圖1  HIV抗原抗體在機體表達過程示意圖

目前國內外實驗室多采用大批量樣本篩查，實驗室初篩選用靈敏度高、特異性稍低的試劑進行檢測。為了盡可能避免假陰性結果出現和縮短窗口期，HIV血清學診斷試劑已經發(fā)展到了第四代，在診斷的敏感度和特異性兩方面都有了巨大的進步，第四代試劑與前三代試劑相比，增加了對p24抗原的檢測，縮短窗口期；初篩陽性的標本再用特異性強的方法進行確認。但靈敏度提高的同時假陽性率也隨之增加，這樣可能給實驗室工作人員帶來不便和受檢者增加心理負擔，因此，了解假陽性的產生原因和影響非常有必要。通過查閱大量文獻總結影響假陽性原因有如下幾個方面：

一、受檢者自身因素

1. 自身免疫性疾病：如類風濕因子（RF）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）腎病綜合征等。

類風濕因子（RF）是一種抗自身的IgG-Fc（Crystallization fraction；容易結晶化的區(qū)帶）的抗體。其免疫球蛋白類型大多是IgM型。因此，有時與免疫反應試劑中所使用的抗體（用于抗原檢測的動物IgG）發(fā)生反應后，呈現假陽性/假高值。

圖2  RF非特異反應示意圖

2.HAMA反應引起假陽性結果

如圖3所示：存在HAMA時，除了正規(guī)的抗原抗體復合物之外，還形成HAMA介導的固態(tài)層抗體/標記抗體復合物，使結果變?yōu)榧訇栃曰蚣俑咧怠?/p>

圖3  HAMA反應模式圖

3. 用藥情況

①注射免疫球蛋白、②分子靶向治療藥物等。

4. 特殊人群

孕婦、新生兒、透析患者等。

以上這些影響因素可能會產生某些物質與試劑中的成分非特異結合，其血清樣本進行檢查時都容易出現有假陽性的結果。因此在臨床檢測HIV抗體時應清楚地了解被檢測者的身體狀況，盡量排除自身因素對檢測結果的干擾。

二、實驗室因素：

1.標本性狀原因

(1)血清微纖維蛋白影響

a.采血時沒有完全混勻或放置時間不夠，導致血液不能充分凝固；

b.離心條件和時間不夠，導致纖維蛋白未分離。

圖4 微纖維蛋白形成原因及解決辦法

(2)嚴重溶血和脂血的標本：由于抽血困難導致溶血和高脂血的患者血液。

2.采血管原因

采血管的材質、添加物、血清分離劑等會對抗原抗體反應產生影響；

3.人為因素

操作錯誤，不能按照標準操作規(guī)程進行實驗操作導致結果錯誤。

三、儀器、試劑的因素

1. 儀器因素

①儀器檢測過程中報警導致；②當天質控失控；③定標曲線不合格等因素都會檢測出儀器未能正常運行，可能會影響血清檢測結果。

2. 試劑因素

①使用過期的試劑；②試劑儲存的環(huán)境不合格；③試劑運輸條件不合格；④試劑可能被污染、⑤試劑本身的高靈敏性等因素影響血清檢測結果，包括試劑中抗體針對的抗原表位不同而引起的靈敏度不一樣，例如HISCL與某公司的HIV試劑都是抗原抗體聯(lián)合檢測的試劑，但由于針對的抗原表位不同，可能出現結果不一致的情況，某公司試劑檢測陰性，HISCL試劑檢測為陽性，HISCL的結果相對于某公司的結果就是“假陽性”。

下面是我司HISCL與R公司用HIV血清盤進行HIV Ag+Ab試劑靈敏度評估數據：

選取10個不同血清盤，其中A-E為病人血清，F-J為HIV-1 Antigen Lysate，并通過對倍稀釋得到。由下圖可以看出，A-E為病人血清，HISCL-5000靈敏度稍高于R公司；F-J為HIV-1 Antigen Lysate 通過對倍稀釋得到不同濃度。通過比較可以看出，由于HISCL-5000在檢測抗原上使用了人源化抗體，因此靈敏度高于R公司。

R公司

HISCL-5000

血清盤A

5/12

5/12

血清盤B

6/6

6/6

血清盤C

5/6

6/6

血清盤D

6/7

6/7

血清盤E

4/4

4/4

血清盤F

4/5

5/5

血清盤G

4/5

5/5

血清盤H

4/5

5/5

血清盤I

4/5

5/5

血清盤J

4/5

5/5

注：A/B表示B個標本中檢測出A個為陽性標本。

3. 試劑方法學

確認實驗的特異性較高，在HIV感染初期“窗口期”，p24抗原大量出現，Symex HISCL所使用人源化抗體的HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑，要比一般只檢測抗體試劑靈敏度高，能夠更早篩查出HIV陽性標本，但由于p24抗體未出現，所以確診實驗有可能為“不確定”或“陰性”，導致人們認為初篩為”假陽性”。

根據上述分析針對可能會引起HIV抗體初篩試驗中出現假陽性結果的原因，提出一些相應的處理措施。具體包括以下幾點：

1）嚴格遵守制度規(guī)范

對初篩試驗呈陽性反應的樣品用原有試劑和不同原理或不同廠家的篩查試劑重復檢測。如兩種試劑復測均呈陽性反應, 或一陰一陽, 需送艾滋病確認實驗室確認，要求所有的工作人員嚴格按照制度進行操作，認真對待工作中的每一個細節(jié)，保證高效率地完成檢測工作，執(zhí)行保密工作，保護受檢者的隱私，避免對其造成心理壓力。

2）正確使用診斷試劑和儀器

①篩查工作中所使用的試劑必須是符合國家食品藥品監(jiān)督管理局中的標準，盡量使用靈敏度高、特異性好的試劑，使用有效期之內的試劑，保證試劑存儲與運輸條件合格，以降低由試劑的原因造成假陽性結果的比率；

②選擇質量好的儀器，必須要驗證儀器的性能。

3）減少操作過程中的失誤

①采血時達到足夠血量避免溶血，拒收嚴重的溶血和脂血標本，嚴格按標準操作規(guī)程進行充分溫預和離心，避免纖維蛋白干擾導致結果假陽性。為確保凝固，采血后全面貫徹反轉混合5次以上，溫浴30min，離心2000g、10min。

②需要檢查儀器運行情況，檢查儀器質控和定標情況是否良好；

③提高操作人員的專業(yè)操作技能、分析問題的能力以及責任心。

4）需要臨床溝通

首先和臨床醫(yī)生溝通，詢問患者基本情況：主訴、病史、臨床癥狀以及用藥情況，綜合判斷是否有其他因素干擾檢測結果。

5）確證實驗

a.HIV初篩陽性的患者，需按照流程進行復檢，并充分考慮可能導致檢測結果假陽性的因素，做出相應的處理措施；

b.在臨床檢測HIV抗體時應清楚地了解被檢測者的身體狀況，盡量排除自身因素對檢測結果的干擾；

c.懷疑標本問題時，使用同種方法復檢時應將標本混勻二次離心后再進行復檢或重新抽血進行復檢；

d.對于復檢結果和初檢不一致者，可建議采用HIV RNA進行復檢；

以上情況最終必須送往CDC進行確診實驗。

【案例分析】

案例一：

某醫(yī)院患者男性48歲，由于出現車禍故障，需要急診手術，醫(yī)生加做了傳染病術前四項篩查，結果如下：

項目

HBsAg

HCVAb

TP

HIV

參考值

<>

IU/mL

<>

COI

<>

COI

<>

COI

結果

0.90

2.1

0.6

1.2

針對以上結果項目出現弱陽性，首先進行標本形狀和儀器質控檢查，標本沒有明顯蛋白絲但比較渾濁，質控良好，經過和老師溝通過程中得知，由于標本沒有完全凝固進行離心，使用3500轉小離心機離心（白天使用3500轉大離心機），建議使用大離心機重新離心10min后進行檢測，結果如下：

項目

HBsAg

HCVAb

TP

HIV

參考值

<>

IU/mL

<>

COI

<>

COI

<>

COI

結果

0.00

0.0

0.0

0.0

以上案例分析影響結果弱陽性出現原因為：標本性狀原因，血清微纖維蛋白影響

①   標本放置時間不夠，導致血液不能充分凝固；

②   離心條件和時間不夠，導致纖維蛋白未分離。

案例二：

某醫(yī)院患者在門診皮膚科診療，醫(yī)生建議篩查TP與HIV，Sysmex HISCL結果HIV陽性，酶法陰性重新復查仍為陰性，送往CDC確認結果不確定，建議4-7周復查，但病人后期再沒有到該院就診，后來得知該患者在其他醫(yī)院復查確診HIV陽性。HISCL所使用HIV抗原抗體聯(lián)合檢測人源化抗體試劑，要比一般只檢測抗體試劑靈敏度高，能夠更早篩查出HIV陽性標本，但由于HIV早期p24抗原出現的時候，抗體還未出現，所以確診實驗有可能為“不確定”或“陰性”，人們認為初篩為”假陽性”。

以上案例分析Sysmex HISCL所使用人源化抗體的HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑，要比一般只檢測抗體試劑靈敏度高，能夠更早篩查出HIV陽性標本，這種標本一定要進行確診實驗確認，如果不確定，一定要建議隔期復查，這樣可以避免HIV漏診。

【小結】

綜上所述,雖然HIV抗體初篩檢測過程中假陽性有多方面原因，因此在臨床應用中應根據實際情況具體分析，這樣需要試驗人員不斷加強業(yè)務知識和提高操作技能，能夠對我們的結果能夠做出準確的解釋至關重要。但是由于目前的技術水平，一般實驗室為初篩實驗室，一定要減少假陰性出現，不能漏診，可以允許適當的假陽性出現，出現時我們和臨床醫(yī)生一起跟患者做好溝通解釋工作。

艾滋病防治工作任重而道遠, 實驗室篩查工作應該更加嚴格控制質量、規(guī)范操作規(guī)程, Sysmex追求在保證不漏檢的情況下, 提高陽性結果的準確率，值得您的信賴！

【參考文獻】

[1] 張曉紅,張倩,周學紅等. 雅培化學發(fā)光法在 HIV 篩查試驗中假陽性分析. 標記免疫分析與臨床[J]. 2013,2 (20):43-45.

[2] 王明珠, 路瑋,姜桂娥. HIV抗體初篩試驗假陽性原因分析及處理. 中國衛(wèi)生檢驗雜志[J].2008,12(18): 2803-2804.

[3] 顧春瑜,劉英麗,王海濱等. 第四代HIV診斷試劑檢測HIV抗體假陽性原囚分析.武警醫(yī)學. 2013,9(24):758-790.

[4] 李德武. HIV抗體初篩試驗假陽性原因探究及處理措施.檢驗醫(yī)學與臨床[J]. 2012.10(9):2492-2493.

[5] 全國艾滋病檢測技術規(guī)范（2015年修訂版).

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網址: HIV篩查有陽性？別慌，看這里！ http://www.u1s5d6.cn/newsview805171.html