艾滋病是由人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV) 引起的一種傳染病，目前中國(guó)艾滋病的感染呈蔓延和增加的趨勢(shì)，談“艾”色變?cè)缫殉蔀榇蠹覍?duì)艾滋病的態(tài)度，因此如何早期發(fā)現(xiàn)和診斷HIV感染對(duì)預(yù)防HIV傳播、控制AIDS的發(fā)展至關(guān)重要。

圖1  HIV抗原抗體在機(jī)體表達(dá)過(guò)程示意圖

目前國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室多采用大批量樣本篩查，實(shí)驗(yàn)室初篩選用靈敏度高、特異性稍低的試劑進(jìn)行檢測(cè)。為了盡可能避免假陰性結(jié)果出現(xiàn)和縮短窗口期，HIV血清學(xué)診斷試劑已經(jīng)發(fā)展到了第四代，在診斷的敏感度和特異性?xún)煞矫娑加辛司薮蟮倪M(jìn)步，第四代試劑與前三代試劑相比，增加了對(duì)p24抗原的檢測(cè)，縮短窗口期；初篩陽(yáng)性的標(biāo)本再用特異性強(qiáng)的方法進(jìn)行確認(rèn)。但靈敏度提高的同時(shí)假陽(yáng)性率也隨之增加，這樣可能給實(shí)驗(yàn)室工作人員帶來(lái)不便和受檢者增加心理負(fù)擔(dān)，因此，了解假陽(yáng)性的產(chǎn)生原因和影響非常有必要。通過(guò)查閱大量文獻(xiàn)總結(jié)影響假陽(yáng)性原因有如下幾個(gè)方面：

一、受檢者自身因素

1. 自身免疫性疾?。喝珙?lèi)風(fēng)濕因子（RF）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）腎病綜合征等。

類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）是一種抗自身的IgG-Fc（Crystallization fraction；容易結(jié)晶化的區(qū)帶）的抗體。其免疫球蛋白類(lèi)型大多是IgM型。因此，有時(shí)與免疫反應(yīng)試劑中所使用的抗體（用于抗原檢測(cè)的動(dòng)物IgG）發(fā)生反應(yīng)后，呈現(xiàn)假陽(yáng)性/假高值。

圖2  RF非特異反應(yīng)示意圖

2.HAMA反應(yīng)引起假陽(yáng)性結(jié)果

如圖3所示：存在HAMA時(shí)，除了正規(guī)的抗原抗體復(fù)合物之外，還形成HAMA介導(dǎo)的固態(tài)層抗體/標(biāo)記抗體復(fù)合物，使結(jié)果變?yōu)榧訇?yáng)性或假高值。

圖3  HAMA反應(yīng)模式圖

3. 用藥情況

①注射免疫球蛋白、②分子靶向治療藥物等。

4. 特殊人群

孕婦、新生兒、透析患者等。

以上這些影響因素可能會(huì)產(chǎn)生某些物質(zhì)與試劑中的成分非特異結(jié)合，其血清樣本進(jìn)行檢查時(shí)都容易出現(xiàn)有假陽(yáng)性的結(jié)果。因此在臨床檢測(cè)HIV抗體時(shí)應(yīng)清楚地了解被檢測(cè)者的身體狀況，盡量排除自身因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。

二、實(shí)驗(yàn)室因素：

1.標(biāo)本性狀原因

(1)血清微纖維蛋白影響

a.采血時(shí)沒(méi)有完全混勻或放置時(shí)間不夠，導(dǎo)致血液不能充分凝固；

b.離心條件和時(shí)間不夠，導(dǎo)致纖維蛋白未分離。

圖4 微纖維蛋白形成原因及解決辦法

(2)嚴(yán)重溶血和脂血的標(biāo)本：由于抽血困難導(dǎo)致溶血和高脂血的患者血液。

2.采血管原因

采血管的材質(zhì)、添加物、血清分離劑等會(huì)對(duì)抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生影響；

3.人為因素

操作錯(cuò)誤，不能按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤。

三、儀器、試劑的因素

1. 儀器因素

①儀器檢測(cè)過(guò)程中報(bào)警導(dǎo)致；②當(dāng)天質(zhì)控失控；③定標(biāo)曲線(xiàn)不合格等因素都會(huì)檢測(cè)出儀器未能正常運(yùn)行，可能會(huì)影響血清檢測(cè)結(jié)果。

2. 試劑因素

①使用過(guò)期的試劑；②試劑儲(chǔ)存的環(huán)境不合格；③試劑運(yùn)輸條件不合格；④試劑可能被污染、⑤試劑本身的高靈敏性等因素影響血清檢測(cè)結(jié)果，包括試劑中抗體針對(duì)的抗原表位不同而引起的靈敏度不一樣，例如HISCL與某公司的HIV試劑都是抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)的試劑，但由于針對(duì)的抗原表位不同，可能出現(xiàn)結(jié)果不一致的情況，某公司試劑檢測(cè)陰性，HISCL試劑檢測(cè)為陽(yáng)性，HISCL的結(jié)果相對(duì)于某公司的結(jié)果就是“假陽(yáng)性”。

下面是我司HISCL與R公司用HIV血清盤(pán)進(jìn)行HIV Ag+Ab試劑靈敏度評(píng)估數(shù)據(jù)：

選取10個(gè)不同血清盤(pán)，其中A-E為病人血清，F(xiàn)-J為HIV-1 Antigen Lysate，并通過(guò)對(duì)倍稀釋得到。由下圖可以看出，A-E為病人血清，HISCL-5000靈敏度稍高于R公司；F-J為HIV-1 Antigen Lysate 通過(guò)對(duì)倍稀釋得到不同濃度。通過(guò)比較可以看出，由于HISCL-5000在檢測(cè)抗原上使用了人源化抗體，因此靈敏度高于R公司。

R公司

HISCL-5000

血清盤(pán)A

5/12

5/12

血清盤(pán)B

6/6

6/6

血清盤(pán)C

5/6

6/6

血清盤(pán)D

6/7

6/7

血清盤(pán)E

4/4

4/4

血清盤(pán)F

4/5

5/5

血清盤(pán)G

4/5

5/5

血清盤(pán)H

4/5

5/5

血清盤(pán)I

4/5

5/5

血清盤(pán)J

4/5

5/5

注：A/B表示B個(gè)標(biāo)本中檢測(cè)出A個(gè)為陽(yáng)性標(biāo)本。

3. 試劑方法學(xué)

確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的特異性較高，在HIV感染初期“窗口期”，p24抗原大量出現(xiàn)，Symex HISCL所使用人源化抗體的HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑，要比一般只檢測(cè)抗體試劑靈敏度高，能夠更早篩查出HIV陽(yáng)性標(biāo)本，但由于p24抗體未出現(xiàn)，所以確診實(shí)驗(yàn)有可能為“不確定”或“陰性”，導(dǎo)致人們認(rèn)為初篩為”假陽(yáng)性”。

根據(jù)上述分析針對(duì)可能會(huì)引起HIV抗體初篩試驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果的原因，提出一些相應(yīng)的處理措施。具體包括以下幾點(diǎn)：

1）嚴(yán)格遵守制度規(guī)范

對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品用原有試劑和不同原理或不同廠(chǎng)家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陽(yáng)性反應(yīng), 或一陰一陽(yáng), 需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)，要求所有的工作人員嚴(yán)格按照制度進(jìn)行操作，認(rèn)真對(duì)待工作中的每一個(gè)細(xì)節(jié)，保證高效率地完成檢測(cè)工作，執(zhí)行保密工作，保護(hù)受檢者的隱私，避免對(duì)其造成心理壓力。

2）正確使用診斷試劑和儀器

①篩查工作中所使用的試劑必須是符合國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局中的標(biāo)準(zhǔn)，盡量使用靈敏度高、特異性好的試劑，使用有效期之內(nèi)的試劑，保證試劑存儲(chǔ)與運(yùn)輸條件合格，以降低由試劑的原因造成假陽(yáng)性結(jié)果的比率；

②選擇質(zhì)量好的儀器，必須要驗(yàn)證儀器的性能。

3）減少操作過(guò)程中的失誤

①采血時(shí)達(dá)到足夠血量避免溶血，拒收嚴(yán)重的溶血和脂血標(biāo)本，嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行充分溫預(yù)和離心，避免纖維蛋白干擾導(dǎo)致結(jié)果假陽(yáng)性。為確保凝固，采血后全面貫徹反轉(zhuǎn)混合5次以上，溫浴30min，離心2000g、10min。

②需要檢查儀器運(yùn)行情況，檢查儀器質(zhì)控和定標(biāo)情況是否良好；

③提高操作人員的專(zhuān)業(yè)操作技能、分析問(wèn)題的能力以及責(zé)任心。

4）需要臨床溝通

首先和臨床醫(yī)生溝通，詢(xún)問(wèn)患者基本情況：主訴、病史、臨床癥狀以及用藥情況，綜合判斷是否有其他因素干擾檢測(cè)結(jié)果。

5）確證實(shí)驗(yàn)

a.HIV初篩陽(yáng)性的患者，需按照流程進(jìn)行復(fù)檢，并充分考慮可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性的因素，做出相應(yīng)的處理措施；

b.在臨床檢測(cè)HIV抗體時(shí)應(yīng)清楚地了解被檢測(cè)者的身體狀況，盡量排除自身因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾；

c.懷疑標(biāo)本問(wèn)題時(shí)，使用同種方法復(fù)檢時(shí)應(yīng)將標(biāo)本混勻二次離心后再進(jìn)行復(fù)檢或重新抽血進(jìn)行復(fù)檢；

d.對(duì)于復(fù)檢結(jié)果和初檢不一致者，可建議采用HIV RNA進(jìn)行復(fù)檢；

以上情況最終必須送往CDC進(jìn)行確診實(shí)驗(yàn)。

【案例分析】

案例一：

某醫(yī)院患者男性48歲，由于出現(xiàn)車(chē)禍故障，需要急診手術(shù)，醫(yī)生加做了傳染病術(shù)前四項(xiàng)篩查，結(jié)果如下：

項(xiàng)目

HBsAg

HCVAb

TP

HIV

參考值

<>

IU/mL

<>

COI

<>

COI

<>

COI

結(jié)果

0.90

2.1

0.6

1.2

針對(duì)以上結(jié)果項(xiàng)目出現(xiàn)弱陽(yáng)性，首先進(jìn)行標(biāo)本形狀和儀器質(zhì)控檢查，標(biāo)本沒(méi)有明顯蛋白絲但比較渾濁，質(zhì)控良好，經(jīng)過(guò)和老師溝通過(guò)程中得知，由于標(biāo)本沒(méi)有完全凝固進(jìn)行離心，使用3500轉(zhuǎn)小離心機(jī)離心（白天使用3500轉(zhuǎn)大離心機(jī)），建議使用大離心機(jī)重新離心10min后進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：

項(xiàng)目

HBsAg

HCVAb

TP

HIV

參考值

<>

IU/mL

<>

COI

<>

COI

<>

COI

結(jié)果

0.00

0.0

0.0

0.0

以上案例分析影響結(jié)果弱陽(yáng)性出現(xiàn)原因?yàn)椋簶?biāo)本性狀原因，血清微纖維蛋白影響

①   標(biāo)本放置時(shí)間不夠，導(dǎo)致血液不能充分凝固；

②   離心條件和時(shí)間不夠，導(dǎo)致纖維蛋白未分離。

案例二：

某醫(yī)院患者在門(mén)診皮膚科診療，醫(yī)生建議篩查T(mén)P與HIV，Sysmex HISCL結(jié)果HIV陽(yáng)性，酶法陰性重新復(fù)查仍為陰性，送往CDC確認(rèn)結(jié)果不確定，建議4-7周復(fù)查，但病人后期再?zèng)]有到該院就診，后來(lái)得知該患者在其他醫(yī)院復(fù)查確診HIV陽(yáng)性。HISCL所使用HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)人源化抗體試劑，要比一般只檢測(cè)抗體試劑靈敏度高，能夠更早篩查出HIV陽(yáng)性標(biāo)本，但由于HIV早期p24抗原出現(xiàn)的時(shí)候，抗體還未出現(xiàn)，所以確診實(shí)驗(yàn)有可能為“不確定”或“陰性”，人們認(rèn)為初篩為”假陽(yáng)性”。

以上案例分析Sysmex HISCL所使用人源化抗體的HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑，要比一般只檢測(cè)抗體試劑靈敏度高，能夠更早篩查出HIV陽(yáng)性標(biāo)本，這種標(biāo)本一定要進(jìn)行確診實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，如果不確定，一定要建議隔期復(fù)查，這樣可以避免HIV漏診。

【小結(jié)】

綜上所述,雖然HIV抗體初篩檢測(cè)過(guò)程中假陽(yáng)性有多方面原因，因此在臨床應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況具體分析，這樣需要試驗(yàn)人員不斷加強(qiáng)業(yè)務(wù)知識(shí)和提高操作技能，能夠?qū)ξ覀兊慕Y(jié)果能夠做出準(zhǔn)確的解釋至關(guān)重要。但是由于目前的技術(shù)水平，一般實(shí)驗(yàn)室為初篩實(shí)驗(yàn)室，一定要減少假陰性出現(xiàn)，不能漏診，可以允許適當(dāng)?shù)募訇?yáng)性出現(xiàn)，出現(xiàn)時(shí)我們和臨床醫(yī)生一起跟患者做好溝通解釋工作。

艾滋病防治工作任重而道遠(yuǎn), 實(shí)驗(yàn)室篩查工作應(yīng)該更加嚴(yán)格控制質(zhì)量、規(guī)范操作規(guī)程, Sysmex追求在保證不漏檢的情況下, 提高陽(yáng)性結(jié)果的準(zhǔn)確率，值得您的信賴(lài)！

【參考文獻(xiàn)】

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