專(zhuān)利名稱(chēng)：：蒸餾出精油后殘留植物組分的回收的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及源自植物的化學(xué)和生物組分。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及從蒸餾出精油后的植物材料殘留物中回收物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
：說(shuō)明書(shū)中引用了多種公開(kāi)出版物，包括專(zhuān)利、公開(kāi)的申請(qǐng)、技術(shù)文獻(xiàn)和學(xué)術(shù)文章。這些公開(kāi)出版物中的每一個(gè)都在此完整引入作為參考。未在說(shuō)明書(shū)中全部引用的公開(kāi)出版物的全部引用在說(shuō)明書(shū)結(jié)尾給出。很多物種的植物被用于健康提升和特定醫(yī)藥用途已有幾千年。近些年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)存在于水果、蔬菜和多葉藥草中以及其它類(lèi)型的植物中的基于植物的酚、類(lèi)黃酮、異黃酮、萜烯、葡糖異硫氰酸鹽和其它化合物具有抗氧化和抗致癌特性及其它健康提升益處。在特定芳香族藥草如薄荷和牛至中，已發(fā)現(xiàn)精油和提取物中含有防腐劑、殺菌劑、抗炎劑和抗病毒劑。由于消費(fèi)者對(duì)天然產(chǎn)物和藥物的偏好不斷增加，源自植物的治療劑的價(jià)值穩(wěn)步提升。此外，某些植物組分更為傳統(tǒng)的價(jià)值基礎(chǔ)，比如對(duì)于香料工業(yè)，仍然很強(qiáng)。精油構(gòu)成一類(lèi)有價(jià)值的植物組分。精油含揮發(fā)性芳香組化合物的濃縮的疏水性液體，通過(guò)從不同植物部分蒸餾得到。精油用于香料、芳香療法、化妝品、香熏，用于調(diào)味的食物和飲料，并用于醫(yī)學(xué)。某些精油的醫(yī)學(xué)價(jià)值可能是相當(dāng)大的。例如，主要含有香芹酚、百里酚和對(duì)傘花烴的牛至精油是非常有效的抗菌和抗微生物劑。精油通過(guò)水或蒸汽蒸餾制造。典型地，將該植物材料浸入水中并煮沸，或者曝露于蒸汽流。將蒸汽和石油蒸氣濃縮，油與水分離。通常，假定殘留植物材料經(jīng)過(guò)蒸餾過(guò)程后不再產(chǎn)出有明顯價(jià)值的額外組分或物質(zhì)，一旦蒸餾出精油，該殘留植物材料將被丟棄。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)方面是從植物材料獲取一種或多種物質(zhì)的方法，包括(a)提供已用水或蒸汽蒸餾提取精油的蒸餾后的植物材料；(b)使蒸餾后的植物材料與溶劑在容許將一種或多種物質(zhì)從植物材料中提取到所述溶劑中的條件下進(jìn)行接觸；和(c)從所述溶劑中獲取所述的一種或多種物質(zhì)。該植物材料可來(lái)自整個(gè)植物或任意植物部分，包括花、種、葉、莖和根中的一種或多種。在某些實(shí)施方案中，該植物材料由莖和葉組成，在一個(gè)示例性實(shí)施方案中使用葉。植物材料可來(lái)自任何提取了精油的植物。在某些實(shí)施方案中，該植物材料來(lái)自選自牛至屬、薄荷屬、藿香屬、羅勒屬、鼠尾草屬植物、蒿屬植物、蜜蜂花屬、蓍屬、百里香屬、Coridothymus、姜味草屬、迷迭香屬、天竺葵屬和錦紫蘇屬的植物種屬。在特定實(shí)施方案中，該植物材料來(lái)自留蘭香、辣薄荷、迷迭香、Origanumsyriacum、Origanumdayi、土香薷、百里香、羅勒或香蜂花。根據(jù)本發(fā)明方法可被離析的物質(zhì)包括但不限于酚類(lèi)化合物、黃酮、異黃酮、糖苷、花青素、原花色素(proanthocyanidin)、原花青素(procyanidin)、兒茶酚、萜烯、木質(zhì)素、單寧酸、芥子油苷(Glucosinilate)、脂肪族有機(jī)酸和環(huán)狀有機(jī)酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，該一種或多種物質(zhì)具有抗氧化活性。在一具體實(shí)施方案中，該方法有利于酚類(lèi)化合物的提取。溶劑或溶劑系統(tǒng)可以是通常用于提取物質(zhì)(例如本發(fā)明所述來(lái)自植物材料的那些)的任何類(lèi)型。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑是醇。在特定提取中，溶劑是80%乙醇。在使用含水溶劑的實(shí)施方案中，該方法還可包括從水中除去溶劑并用不同的溶劑如乙酸乙酯萃取剩余的水。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括用另一種溶劑對(duì)蒸餾后的植物材料進(jìn)行提取。在一個(gè)實(shí)施方案中，其他溶劑是堿，如NaOH。在另一實(shí)施方案中，其他溶劑是烴，如己烷。在另一實(shí)施方案中，可以用不同溶劑對(duì)蒸餾后的植物材料進(jìn)行二、三或更多次提取。單獨(dú)或結(jié)合起來(lái)，該植物材料可用相同溶劑提取兩次或更多次。本發(fā)明的另一方面是從植物材料中獲取精油和一種或多種額外物質(zhì)的方法，包括(a)將所述植物材料進(jìn)行水或蒸汽蒸餾獲取所述精油，這樣形成了蒸餾后的植物材料；(b)使蒸餾后的植物材料與溶劑在容許將一種或多種物質(zhì)從植物材料中提取到所述溶劑中的條件下進(jìn)行接觸；和(c)從所述溶劑中獲取所述的一種或多種物質(zhì)。該植物材料可來(lái)自整個(gè)植物或任意植物部分，包括花、種、葉、莖和根中的一種或多種。在某些實(shí)施方案中，該植物材料由莖和葉組成，在一個(gè)示例性實(shí)施方案中使用葉。植物材料可來(lái)自任何提取了精油的植物，包括但不限于上述屬和種。根據(jù)本發(fā)明方法可被離析的物質(zhì)包括精油和，但不限于，上述和/或說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例中詳細(xì)描述的任意物質(zhì)。在一具體實(shí)施方案中，該方法有利于酚類(lèi)化合物的提取。溶劑或溶劑系統(tǒng)可以是通常用于提取物質(zhì)(例如本發(fā)明所述來(lái)自植物材料的那些)的任何類(lèi)型。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑是醇。在特定提取中，溶劑是80%乙醇。在使用含水溶劑的實(shí)施方案中，該方法還可包括從水中除去溶劑并用不同的溶劑如乙酸乙酯萃取剩余的水。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括用另一種溶劑對(duì)蒸餾后的植物材料進(jìn)行提取。在一個(gè)實(shí)施方案中，其他溶劑是堿，如NaOH。在另一實(shí)施方案中，其他溶劑是烴，如己垸。在另一實(shí)施方案中，可以用不同溶劑對(duì)蒸餾后的植物材料進(jìn)行二、三或更多次提取。單獨(dú)或結(jié)合起來(lái)，該植物材料可用相同溶劑提取兩次或更多次。本發(fā)明的另一方面是根據(jù)上述任一方法獲取的一種或多種植物物質(zhì)的集合體。在一個(gè)實(shí)施方案中，該集合體存在于蒸發(fā)溶劑后形成的干殘留物中。在另一實(shí)施方案中，該集合體存在于用于提取的溶劑中。在另一實(shí)施方案中，該集合體存在于不同溶劑或溶劑系統(tǒng)。該集合體可包括上文或整個(gè)說(shuō)明書(shū)中所列的一種或多種物質(zhì)。在示例性實(shí)施方案中，該植物材料是牛至。在一個(gè)實(shí)施方案中，該集合體包括一種或多種如下物質(zhì)鄰苯二酚；4-乙烯基苯酚；5,4'-二甲氧基-2-甲基聯(lián)節(jié)；4-乙烯基甲基兒茶酚；丁香醇(syringol);4-乙酰基苯甲醚；4-羥基苯甲醛；香草醛；2,1,3-苯并噻二唑；3-羥基乙酰苯；乙酰香草酮；乙酰藜蘆酮；丁香醛；和乙酰丁香醛。在另一示例性實(shí)施方案中，集合體包括一種或多種下述物質(zhì)丁香酸；雙萜；2-異丙基-5-甲基-對(duì)苯二酚；香豆酸；阿魏酸；二氫咖啡酸；咖啡酸；迷迭香酸(迷迭香酸acid);以及各種類(lèi)黃酮。在另一示例性實(shí)施方案中，集合體包括百里酚；香芹酚；卩-紅沒(méi)藥烯；新植二烯；百里醌；百里氫醌；醋酸植醇酯；角鯊烯；維生素E;植醇；和(23S)乙基膽甾醇中的一個(gè)或多個(gè)。參考隨后的具體實(shí)施方式和實(shí)施例，將會(huì)清楚本發(fā)明的其他特征和益處。具體實(shí)施方式根據(jù)本發(fā)明的不同方面，提供了從已用水或蒸汽蒸餾提取精油的植物材料中獲取重要物質(zhì)的方法。迄今為止，工業(yè)中的一個(gè)做法是蒸餾出精油后丟棄殘留植物材料，假定這樣的殘留材料中不能獲取有明顯價(jià)值的額外組分。與此相反，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了許多物質(zhì)的確可以從這樣的植物材料中得到，其中許多表現(xiàn)出一定的功能特性，如抗氧化性，這些功能特性與從沒(méi)有進(jìn)行水或蒸汽蒸餾的植物材料中離析出的物質(zhì)的特性相當(dāng)。這些方法可對(duì)任何植物實(shí)施。適當(dāng)?shù)闹参锸呛锌捎孟率龇椒ㄌ崛〉奈镔|(zhì)或試劑的具有至少一個(gè)組織或器官的那些，且通過(guò)水或蒸汽蒸餾可從中獲取精油。在某些實(shí)施方案中，選擇的植物物質(zhì)或試劑(本文中有時(shí)稱(chēng)作組分)包括酚類(lèi)化合物、黃酮、異黃酮或其他類(lèi)黃酮化合物、糖苷、花青素、原花色素和原花青素及相關(guān)化合物、兒茶酚、萜烯、木質(zhì)素、單寧酸、芥子油苷、脂肪族有機(jī)酸和環(huán)狀有機(jī)酸，這只是幾個(gè)例子而已。適當(dāng)?shù)闹参锇ǖ幌抻诋?dāng)歸、茴香、香脂、羅勒、月桂樹(shù)(bay)、月桂(baylaurel)、蜂蠟、安息香、佛手柑、佛手柑薄荷、玫瑰木、蕓香料灌木(boronia)、白千層(cajeput)、小豆蔻、胡蘿卜籽、香柏木、洋甘菊、肉桂、香草(citronella)、鼠尾草、丁香、胡荽、柏樹(shù)、蒔蘿、欖香、桉樹(shù)(包括檸檬桉樹(shù))、小茴香(茴香)、冷杉、白松香、天竺葵(包括玫瑰天竺葵)、生姜、葡萄柚、蠟菊、牛膝草、不雕花、茉莉、杜松子、kanuka、薰衣草、醒目薰衣草、檸檬、擰檬香草、酸橙、菩提樹(shù)花、柑橘樹(shù)、麥盧卡樹(shù)、馬郁蘭、山雞椒、沒(méi)藥樹(shù)、愛(ài)神木(包括玫瑰愛(ài)神木)、橙花、綠花白千層、肉豆蔻、橡苔、乳香橙(苦和甜)、牛至、玫瑰草、歐芹、廣藿香、胡椒(黑、白、甜或辣)、胡椒薄荷和相關(guān)薄荷、petitgrainpine、羅文莎葉、玫瑰、迷迭香、紅木、檀香木、留蘭香、甘松、云杉、橘子、茶樹(shù)(普通、檸檬、新西蘭)、麝香草、煙草、晚香玉、香草、香根草、紫羅蘭葉、西洋蓍草和依蘭樹(shù)。典型地，來(lái)自唇形科、傘形科和菊科(Apiaceae)的生產(chǎn)精油的植物適于使用。在特定實(shí)施例中，植物來(lái)自薄荷科或其他芳香族藥草，如牛至和迷迭香，舉例而已。特別適合的植物包括，但不限于，牛至屬(如0.syriacum、O.dayi、土香薷、O.onites)、薄荷屬(如M.longifolia、留蘭香、辣薄荷)藿香、羅勒屬(如羅勒、樹(shù)羅勒、O.canum、0.americanum)、鼠尾草屬(如地榆、S.fruticosa)、蒿屬(如A.dranunculus、A.judaica、A.aborescens、A.absinthum)、香蜂花、蓍屬(如A.millenfolium、A.fragrantissimum)、百里香、Coridothymuscapitatus、Micromeriafruticosa、迷迭香、香葉天竺葵(天竺葵)和錦紫蘇屬。在示例性實(shí)施方案中，使用薄荷屬(如留蘭香、辣薄荷)、迷迭香屬(迷迭香)、牛至屬(Origanumsyriacum、O.dayi、土香薷)、百里香屬(百里香)、羅勒和香蜂花。獲取精油的植物的任何部分適合應(yīng)用于本發(fā)明。這些包括，但不限于，花、種、苞和其他花朵部分、莖、葉和根。在某些實(shí)施方案中，使用葉和莖。在其他實(shí)施方案中，使用葉。該方法包括(1)獲取已用水和/或蒸汽蒸餾提取精油的殘留植物材料，(2)使該植物材料與溶劑在容許將物質(zhì)從植物材料中提取到溶劑中的條件下進(jìn)行接觸；和(3)從該溶劑中獲取該物質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，溶劑是水溶性有機(jī)溶劑，如醇。任選地，可用不同溶劑系統(tǒng)對(duì)植物殘留物進(jìn)行一次或多次額外提取，以從植物材料中釋放一種或多種重要物質(zhì)。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，用NaOH對(duì)殘留材料進(jìn)行第二提取，任選加熱，以從細(xì)胞壁中釋放酚類(lèi)。在另一示例性實(shí)施方案中，用非極性溶劑如戊烷、己烷或庚垸對(duì)殘留物進(jìn)行提取，蒸發(fā)干燥提取物并將溶解固體再懸浮于適當(dāng)介質(zhì)如油中。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解植物材料在進(jìn)行提取之前和/或之后可進(jìn)行干燥，正如慣例實(shí)踐那樣。在包括多于一次提取的另一實(shí)施方案中，提取次序可以顛倒，或者，在多于兩次的情況中，提取次序可以改變。例如，利用非極性溶劑的提取可以在用極性或水溶性溶劑提取之前進(jìn)行。在另一實(shí)施方案中，含有提取的植物物質(zhì)的溶劑自身可被進(jìn)一歩提取。例如，植物材料可用含水醇如80%乙醇提取。然后該醇可從溶劑中除去，剩下水。接著水可用另一種溶劑如乙酸乙酯萃取。根據(jù)相對(duì)溶解度，一些植物物質(zhì)仍留在水相中而其他部分到其他溶劑相。適合用于本發(fā)明的溶劑包括任何能夠從植物材料中提取上述選擇的組分或物質(zhì)的溶劑。特別適合的溶劑是那些無(wú)毒或毒性有限的溶劑。適合的溶劑的例子包括但不限于乙酸、丙酮、茴香醚、l-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、枯烯、二甲亞砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸異丁酯、乙酸異丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-l-丁醇、甲乙酮、甲基異丁基酮、2-甲基-l-丙醇、戊垸、l-戊醇、1-丙醇、2-丙醇、乙酸丙酯、四氫呋喃、氫氧化鈉、氫氧化鉀、乙酸乙酯、植物油、丙二醇、neobeoil、甘油、芐醇和三乙酸甘油酯。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，溶劑是食品級(jí)的。其他合適的溶劑包括但不限于二氯甲烷、1，2-二甲氧基乙垸、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、1,4-二噁垸、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己垸、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基環(huán)己烷、N-甲基吡咯垸酮、硝基甲烷、吡啶、環(huán)丁砜、四氫化萘、甲苯、1,1,2-三氯乙烯和二甲苯。在一具體實(shí)施方案中，酚類(lèi)化合物和其它水溶性物質(zhì)作為目標(biāo)提取。在這種情況下，特別適合的第一提取包括將蒸餾后的植物材料與含水醇如80%乙醇接觸。該植物材料的后序提取可包括堿如氫氧化鈉以從植物細(xì)胞壁釋放酚類(lèi)。在第一溶劑中的醇蒸發(fā)后例如使用乙酸乙酯對(duì)水進(jìn)行進(jìn)一步的萃取可進(jìn)一步純化和濃縮酚類(lèi)化合物。本發(fā)明的另一方面是從植物中回收至少一種精油和至少一種其它所選組分的系統(tǒng)。如上所述，該方法將精油的典型水或蒸汽蒸餾與后序溶劑提取步驟或步驟聯(lián)合結(jié)合起來(lái)。該方法包括下述基本步驟(1)根據(jù)本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法，對(duì)植物材料進(jìn)行水和/或蒸汽蒸餾獲取精油，(2)蒸餾完成后，使植物材料與溶劑在容許將物質(zhì)從植物材料中提取到該溶劑中的條件下進(jìn)行接觸，和(3)從該溶劑中獲取該物質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，溶劑是水溶性有機(jī)溶劑，如醇。任選地，可用不同溶劑系統(tǒng)對(duì)植物殘留物進(jìn)行一次或多次額外提取，以從植物材料中釋放一種或多種重要物質(zhì)。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，用NaOH對(duì)殘留材料進(jìn)行第二提取，任選加熱，以從細(xì)胞壁中釋放酚類(lèi)。在另一示例性實(shí)施方案中，用非極性溶劑如戊垸、己烷或庚垸對(duì)殘留物進(jìn)行提取，蒸發(fā)干燥提取物并將溶解固體再懸浮于適當(dāng)介質(zhì)如油中。在另一實(shí)施方案中，含有提取的植物物質(zhì)的溶劑自身可被進(jìn)一步提取。例如，植物材料可用含水醇如80%乙醇提取。然后該醇可從溶劑中除去，剩下水。接著水可用另一種溶劑如乙酸乙酯萃取。根據(jù)相對(duì)溶解度，一些植物物質(zhì)仍留在水相中而其他部分到其他溶劑相。至于前述方法，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解植物材料在進(jìn)行蒸餾前，和/或進(jìn)行提取之前和/或之后可進(jìn)行干燥，正如慣例實(shí)踐那樣。也可以理解，在多次提取的情況下，如果需要，溶劑步驟可以顛倒或次序可以改變。適合本方法的溶劑與用于前述方法的上述那些相同。本發(fā)明的另一方面是根據(jù)上述任一方法獲取的一種或多種植物物質(zhì)的集合體。在一個(gè)實(shí)施方案中，集合體存在于蒸發(fā)溶劑后形成的干殘留物中。在另一實(shí)施方案中，集合體存在于用于提取的溶劑中。在另一實(shí)施方案中，集合體存在于不同溶劑或溶劑系統(tǒng)。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會(huì)意識(shí)到的，選擇的溶劑系統(tǒng)和提取方法將影響提取的不同物質(zhì)的含量和數(shù)量。因而，根據(jù)植物材料、使用的溶劑系統(tǒng)和條件且對(duì)于不同提取，可得到不同提取物分布。例如，在使用牛至的示例性實(shí)施方案中，如實(shí)施例3所述，利用含水乙醇的提取得到12-14種具體物質(zhì)的集合體，而己烷提取得到物質(zhì)的重疊而非同一集合體。提供下述實(shí)施例更具體的描述本發(fā)明。他們用于說(shuō)明，而非限制本發(fā)明。實(shí)施例1蒸餾后牛至植物材料的提取在這些方法中，使用牛至植物的不同部分，如葉、莖、花。在部分方法中，植物部分聯(lián)合使用，而在其它方法中他們被單獨(dú)處理。發(fā)現(xiàn)牛至葉特別適合。將已進(jìn)行水/蒸汽蒸餾除去精油的植物材料干燥至大約7-10%水分含量并研磨成細(xì)粉。將該粉與80%乙醇以一份粉對(duì)十份溶劑的比例混合，并置于旋轉(zhuǎn)混合器中在20-25"下大約150rpm的速度下混合12小時(shí)。通過(guò)重力或抽吸過(guò)率從植物殘留物中分離溶劑。在3(TC真空條件下從溶劑中蒸發(fā)乙醇，保留含溶解的植物物質(zhì)的水。作為任選步驟，通過(guò)將水餾分與乙酸乙酯在分離漏斗中混合用乙酸乙酯萃取含植物物質(zhì)的水餾分，然后彼此分離各相。該提取典型的進(jìn)行2-4次，合并乙酸乙酯部分。通過(guò)與己烷混合將植物殘留物進(jìn)行第二提取。通過(guò)過(guò)濾從植物殘留物中分離己烷。將溶劑蒸發(fā)干燥并將溶解的固體再懸浮于油中。將該方法重復(fù)至少兩次，但更典型的是3-4次，之后丟棄己烷提取的植物殘留物。在不同樣品中采用替代第二提取。提取了植物殘留物的乙醇與過(guò)量1MNaOH混合并60。C培養(yǎng)過(guò)夜。接著用HC1中和提取物直至pH為4.5。通過(guò)過(guò)濾將含有與細(xì)胞壁相關(guān)的酚類(lèi)化合物的液體從植物殘留物中分離。丟棄該植物殘留物。上述提取方法包括乙醇提取和，任選地，額外提取之一，己經(jīng)在來(lái)自下述物種的蒸餾后植物材料上實(shí)施薄荷屬(如留蘭香、辣薄荷)、迷迭香、牛至屬(如0.syriacum、0.dayi、土香薷)、羅勒、百里香和香蜂花。實(shí)施例2從Menthalongifolia蒸餾精油和植物材料的提取植物材料MenthalongifoliaL.的選擇性克隆從25個(gè)野生種群中分離并轉(zhuǎn)移至位于NeweYa'arResearchCenter,RamatYishay,Israel的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)。這些植物在當(dāng)?shù)卣迟|(zhì)土中生長(zhǎng)，僅少量灌溉。使用的農(nóng)業(yè)實(shí)踐是在描述Lamiaceae的其它物種時(shí)描述的那些(Dudai等人，1992PhysiologiaPlantarum84:453-459)。所收集植物的葉和莖在40。C干燥72小時(shí)，接著就在提取前在咖啡研磨機(jī)中將其磨碎。精油蒸餾秤重大約250g新鮮植物材料作為樣品，將樣品在改進(jìn)的Clevenger設(shè)備中水力蒸餾1.5h。將精油冷卻并從共存水中分離(Dudai等人,1992,同上)。酚酸提取、分析和抗氧化活性提取1.自由形式酚類(lèi)化合物的提取(提取I)。300mg研磨的Menthasp.葉和莖與25mL80%甲醇在50mL試管中混合。這些試管在室溫165rpm下振蕩過(guò)夜。接下來(lái)，將2mL甲醇提取物置于Eppendorf試管中并在Eppendorf離心分離機(jī)中旋轉(zhuǎn)5分鐘以在將其用于分析前除去顆粒。剩余提取物在-2(TC保存用于進(jìn)一步分析。2.與細(xì)胞壁結(jié)合的酚類(lèi)化合物的提取。來(lái)自提取I的上清液用來(lái)評(píng)估自由形式的酚類(lèi)。提取后剩余的植物材料用3體積甲醇和3體積丙酮洗滌洗掉殘留的自由酚類(lèi)，或者使用Agilent8453UV可見(jiàn)光分光光度計(jì)在280nm處洗滌溶劑的讀數(shù)為零為止。將50mg溶劑洗滌且空氣干燥的殘留物置于2mLEppendorf試管中并與1mL1MNaOH混合。這些試管在60。C培養(yǎng)過(guò)夜。接下來(lái)，加入大約100|iL10MHC1來(lái)中和提取物直到pH為4.5。接著這些試管在Eppendorf離心分離機(jī)中分離5分鐘。得到的上清液稱(chēng)作細(xì)胞壁提取物，用來(lái)評(píng)價(jià)與細(xì)胞壁結(jié)合的酚類(lèi)。3.抗氧化活性。自由基清除劑試驗(yàn)，使用U-二苯基-2-苦基腈(DPPH)。在薄荷葉和莖組織提取物(代表自由形式的酚類(lèi))或者細(xì)胞壁提取物(代表與細(xì)胞壁結(jié)合的酚類(lèi)化合物)的存在下，通過(guò)監(jiān)測(cè)DPPH的下降測(cè)量自由基清除劑試驗(yàn)(Sigma,St.Louis,USA)。如下所述，使用Agilent8453UV可見(jiàn)光分光光度計(jì)通過(guò)光譜法測(cè)量抗氧化活性。將6mgDPPH混入100mL100%乙醇中通過(guò)強(qiáng)力混合15分鐘直到其溶解。在每次新分析中新制備反應(yīng)試劑。新鮮未還原的DDPH試劑的紫色調(diào)節(jié)到大概00517=1.0。10pL薄荷提取物，無(wú)論是自由形式或是與細(xì)胞壁結(jié)合，置于干燥Eppendorf試管中。接著，加入990fiLDPPH試劑。該混合物在室溫暗處培養(yǎng)1小時(shí)，之后在517nm處可讀到DPPH-薄荷混合物的吸光率。獲得的吸光率值從原始紫色在00517=l.O處的原始基線讀數(shù)減去。留心讀OD5n處在0.3至0.6范圍內(nèi)的樣品，以便保留線形范圍。由于此原因，一些樣品在試驗(yàn)前進(jìn)行稀釋。在與薄荷提取物相同條件下做綠原酸(Sigma，St.LouisUSA)誘導(dǎo)的DPPH下降的標(biāo)準(zhǔn)曲線。接著抗氧化活性用綠原酸等同物表示。迷迭香酸、香豆酸和咖啡酸的HPLC分析HPLC(Waters,USA)用于酚酸的分離和評(píng)價(jià)。使用薄荷葉和莖的甲醇提取物(代表自由形式的酚類(lèi)化合物)來(lái)分析迷迭香酸含量。HPLC條件如下C-18柱(Sigma，St.Louis,USA),250X4.6mm,5iim顆粒尺寸，流速為1mL/min.和注射體積為20pL。HPLC洗脫的迷迭香酸的量根據(jù)0.05-0.5mg/mL范圍內(nèi)的迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。咖啡酸和香豆酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線在0.01-0.1mg/mL間。迷迭香酸使用的洗脫方案描述于下表1中?？Х人岷拖愣顾崾褂玫南疵摲桨该枋鲇谙卤?中。表1.用于迷迭香酸的HPLC洗脫方案溶劑A乙酰腈(Acetilonitrile)溶劑B0.1o/。磷酸330nm的吸光度<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表2.咖啡酸和香豆酸的HPLC洗脫方案溶劑A含1.25%乙酸的水溶劑B含1.25%乙酸的甲醇280nm的吸光度<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>在替代方法中，上述洗脫方案在已進(jìn)行水/蒸汽蒸餾的7kr.植物材料上實(shí)施。實(shí)施例3牛至提取物中總酚和抗氧化活性在精油蒸餾前及后的比較，和提取物的分析植物材料使用培養(yǎng)的牛至(土香薷)。蒸餾前或后(根據(jù)處理)，將植物材料干燥至7-10%水分含量并研磨成粉末。精油蒸餾大約2,000kg現(xiàn)場(chǎng)干燥的牛至(40%濕度)通過(guò)市售蒸汽蒸餾裝置(NewhouseManufacturingCo.,Inc.Redmond,OR)在20立方米容器中蒸餾。使用該材料的樣品。酚酸提取、分析和抗氧化活性提取自由形式的酚類(lèi)化合物的提取(提取1)。200-300mg研磨的葉和莖(蒸餾前或后)與25-50mL80。/。乙醇在室溫下在大約150-165rpm下混合過(guò)夜。接下來(lái)，乙醇提取物的一等份離心分離5分鐘以在使用其用于分析前除去顆粒。剩余提取物在-2(TC保存用于進(jìn)一步分析。與細(xì)胞壁結(jié)合的酚類(lèi)化合物的NaOH提取。來(lái)自提取I的上清液用來(lái)評(píng)估自由形式的酚類(lèi)。乙醇提取后剩余的一部分植物材料用3體積乙醇和3體積丙酮洗滌洗掉殘留的自由酚類(lèi)，或者直到洗滌溶劑在280nm的讀數(shù)為零為止。將50mg溶劑洗滌且空氣干燥的殘留物置于2mLEppendorf試管中并與1mL1MNaOH混合。這些試管在6(TC培養(yǎng)過(guò)夜。接下來(lái)，加入大約100|iL10MHC1來(lái)中和提取物直到pH為4.5。接著這些試管在Eppendorf離心分離機(jī)中分離5分鐘。得到的上清液稱(chēng)作細(xì)胞壁提取物，用來(lái)評(píng)價(jià)與細(xì)胞壁結(jié)合的酚類(lèi)。額外水溶性組分的己烷提取。將乙醇提取后剩余的植物材料的一部分干燥，然后與己垸混合并在旋轉(zhuǎn)混合器中在150rpm、25'C條件下培養(yǎng)過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾從植物材料中分離己烷提取物。將該提取方法在植物材料上重復(fù)3-4次，之后合并己烷部分，蒸發(fā)己垸，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法將剩余材料再懸浮并制備用于GC-MS?？寡趸钚?。自由基清除劑試驗(yàn)，使用U-二苯基-2-苦基腈〖DPPH)。在植物組織提取物(代表自由形式的酚類(lèi))或者細(xì)胞壁提取物(代表與細(xì)胞壁結(jié)合的酚類(lèi)化合物)的存在下，通過(guò)監(jiān)測(cè)DPPH的下降測(cè)量自由基清除劑試驗(yàn)(Sigma，St.Louis,USA)。如下所述，通過(guò)光譜法測(cè)量抗氧化活性。將6mgDPPH混入100mL100%乙醇中通過(guò)強(qiáng)力混合15分鐘直到其溶解。在每次新分析中新制備反應(yīng)試劑。新鮮未還原的DDPH試劑的紫色調(diào)節(jié)到大概ODsn:1.0。10^L薄荷提取物，無(wú)論是自由形式或是與細(xì)胞壁結(jié)合，置于干燥Eppendorf試管中。接著，加入990pLDPPH試劑。該混合物在室溫暗處培養(yǎng)1小時(shí)，之后在517nm處讀到DPPH-薄荷混合物的吸光率。獲得的吸光率值從原始紫色在OD517=1.0處的原始基線讀數(shù)減去。留心讀ODsn處在0.3至0.6范圍內(nèi)的樣品，以便保留線形范圍。由于此原因，一些樣品在試驗(yàn)前進(jìn)行稀釋。在與植物提取物相同條件下做綠原酸(Sigma,St.LouisUSA)誘導(dǎo)的DPPH下降的標(biāo)準(zhǔn)曲線。接著抗氧化活性用綠原酸等同物表示。迷迭香酸和咖啡酸的HPLC分析HPLC(Waters,USA)用于酚酸的分離和評(píng)價(jià)。使用組織的乙醇提取物(代表自由形式的酚類(lèi)化合物)來(lái)分析迷迭香酸含量。HPLC條件如下C-18柱(Sigma，St.Louis,USA),250X4.6mm,5顆粒尺寸，流速為1mL/min.和注射體積為20pL。HPLC洗脫的迷迭香酸的量根據(jù)0.05-0.5mg/mL范圍內(nèi)的迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算?？Х人岬臉?biāo)準(zhǔn)曲線在0.01-0.1mg/mL間。迷迭香酸使用的洗脫方案與實(shí)施例2表1描述的相同。對(duì)咖啡酸所用的洗脫方案與實(shí)施例2表2描述的相同。乙醇提取物(提取物I)和己烷提取物也根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法通過(guò)GC-MS分析，確定主要組分。結(jié)果測(cè)量了蒸餾前和蒸餾后的植物材料的乙醇提取物(自由酚類(lèi))和NaOH提取物(細(xì)胞壁材料)中的總酚和抗氧化活性，結(jié)果表示在表3中。表3.<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>測(cè)量了蒸餾前和蒸餾后的植物材料的乙醇提取物(自由酚類(lèi))中和乙醇隨后NaOH提取物(細(xì)胞壁材料)中的迷迭香酸(RA)以及乙醇隨后NaOH提取物中的咖啡酸(CAF)的量，結(jié)果表示在表4中。表4.<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>將蒸餾后的牛至植物材料的乙醇提取物進(jìn)行GC-MS分析和HPLC-MS分析確定化合物。一個(gè)樣品的GC-MS分析確定下述化合物鄰苯二酚；4-乙烯基苯酚；5，4'-二甲氧基-2-甲基聯(lián)節(jié)；4-乙烯基甲基兒茶酚；丁香醇；4-乙?；郊酌眩?-羥基苯甲醛；香草醛；2,1,3-苯并噻二唑；3-羥基乙酰苯；乙酰香草酮；乙酰藜蘆酮；丁香醛；和乙酰丁香醛。另一樣品的GC-MS分析確定下述化合物3-羥基乙酰苯；4-乙酰基苯甲醚；4-羥基苯甲醛；4-乙烯基甲基兒茶酚；乙酰丁香醛；鄰苯二酚；4-乙烯基苯酚；乙酰香草酮；乙酰藜盧酮；丁香醛；丁香醇；和香草醛。另一樣品的HPLC-MS分析確定下述化合物丁香酸；雙萜；2-異丙基-5-甲基-對(duì)苯二酚；香豆酸；阿魏酸；二氫咖啡酸；咖啡酸；迷迭香酸；以及各種類(lèi)黃酮。乙醇提取了的蒸餾后的植物材料的己垸提取物進(jìn)行GC-MS確定化合物。兩種不同樣品的GC-MS分析確定下述化合物百里酚；香芹酚；(3-紅沒(méi)藥烯；新植二烯；百里醌；百里氫醌；醋酸植醇酯；角鯊烯；維生素E;植醇；和(23S)乙基膽甾醇。實(shí)施例3迷迭香提取物中總酚和抗氧化活性在精油蒸餾前及后的比較使用實(shí)施例2中描述的方法，在精油蒸餾前或后將培養(yǎng)的迷迭香(Rosmarinusofficianalis)植物材料(葉和莖)進(jìn)行乙醇提取。測(cè)量提取物中的總酚和抗氧化活性，結(jié)果表示于表5中。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>正如所見(jiàn)的，在該情況下，從蒸餾后材料中回收得到的酚類(lèi)和抗氧化材料多于從蒸餾前材料中回收的。不限制于任何具體基本機(jī)制，對(duì)于該結(jié)果的一個(gè)解釋是蒸餾方法本身引起這些物質(zhì)的部分釋放，使得它們更利于被乙醇提取。本發(fā)明不限制于任何如上描述和示例的實(shí)施方案，而是能夠在所附權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)變化和修訂。權(quán)利要求1.從植物材料中獲取一種或多種物質(zhì)的方法，包括(a)提供已用水或蒸汽蒸餾提取精油的蒸餾后的植物材料；(b)使蒸餾后的植物材料與溶劑在容許將一種或多種物質(zhì)從植物材料中提取到所述溶劑中的條件下進(jìn)行接觸；和(c)從所述溶劑中獲取所述的一種或多種物質(zhì)。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述植物材料包括花、種、葉、莖和根中的一種或多種。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種物質(zhì)選自酚類(lèi)化合物、黃酮、異黃酮、糖苷、花青素、原花色素、原花青素、兒茶酚、萜烯、木質(zhì)素、單寧酸、芥子油苷、脂肪族有機(jī)酸和環(huán)狀有機(jī)酸。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述一種或多種物質(zhì)具有抗氧化活性。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述植物材料來(lái)自選自下述的植物種屬牛至屬、薄荷屬、藿香屬、羅勒屬、鼠尾草屬、蒿屬、蜜蜂花屬、蓍屬、百里香屬、Coridothymus、姜味草屬、迷迭香屬、天竺葵屬和錦紫蘇屬。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述植物材料來(lái)自留蘭香、辣薄荷、迷迭香、Origanumsyriacum、Origanumdayi、土香薷、百里香，羅革力或香蜂花。7.權(quán)利要求1的方法，其中所述溶劑是醇。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述溶劑是80%乙醇。9.權(quán)利要求1的方法，還包括用第二溶劑對(duì)蒸餾后的植物材料進(jìn)行提取。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述第二溶劑是NaOH。11.權(quán)利要求9的方法，其中所述第二溶劑是己垸。12.權(quán)利要求8的方法，還包括從溶劑中除去乙醇并用乙酸乙酯萃取剩余的水。13.從植物材料中獲取精油和一種或多種額外物質(zhì)的方法，包括(a)將所述植物材料進(jìn)行水或蒸汽蒸餾獲取所述精油，這樣形成了蒸餾后的植物材料；(b)使蒸餾后的植物材料與溶劑在容許將一種或多種物質(zhì)從植物材料中提取到所述溶劑中的條件下進(jìn)行接觸；和(c)從所述溶劑中獲取所述的一種或多種物質(zhì)。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述植物材料包括花、種、葉、莖和根中的一種或多種。15.權(quán)利要求13的方法，其中所述一種或多種物質(zhì)選自酚類(lèi)化合物、黃酮、異黃酮、糖苷、花青素、原花色素、原花青素、兒茶酚、萜烯、木質(zhì)素、單寧酸、芥子油苷、脂肪族有機(jī)酸和環(huán)狀有機(jī)酸。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述一種或多種物質(zhì)具有抗氧化活性。17.權(quán)利要求13的方法，其中所述植物材料來(lái)自選自下述的植物種屬牛至屬、薄荷屬、藿香屬、羅勒屬、鼠尾草屬、蒿屬、蜜蜂花屬、蓍屬、百里香屬、Coridothymus、姜味草屬、迷迭香屬、天竺葵屬和錦紫蘇屬。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述植物材料來(lái)自留蘭香、辣薄荷、迷迭香、Origanumsyriac畫(huà)、Origanumdayi、土香薷、百里香、羅勒或香蜂花。19.權(quán)利要求13的方法，其中所述溶劑是醇。20.權(quán)利要求19的方法，其中所述溶劑是80%乙醇。21.權(quán)利要求13的方法，還包括用第二溶劑對(duì)蒸餾后的植物材料進(jìn)行提取。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述第二溶劑是NaOH。23.權(quán)利要求21的方法，其中所述第二溶劑是己垸。24.權(quán)利要求20的方法，還包括從溶劑中除去乙醇并用乙酸乙酯萃取剩余的水。25.由權(quán)利要求1或13的方法制備的植物物質(zhì)的集合體。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了從蒸餾出油后的植物中回收有價(jià)值的化合物和物質(zhì)的方法。該方法包括用不同的含水和非水溶劑對(duì)已蒸餾出油的植物材料的提取。文檔編號(hào)C07C7/00GK101365668SQ200680047474公開(kāi)日2009年2月11日申請(qǐng)日期2006年12月18日優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日發(fā)明者D·哈維金-弗蘭克申請(qǐng)人:巴克多天然防腐劑有限公司

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