(1.天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402；3.天津農(nóng)學(xué)院 食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津300384)

摘要:為研究低魚粉飼料中添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦Litopenaeus vannamei生長、免疫和腸道健康的影響，以初始體質(zhì)量為(7.54±0.40) g的凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象，將720尾對(duì)蝦隨機(jī)分成6組，每組設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)平行40尾蝦，試驗(yàn)設(shè)正對(duì)照組[含24%魚粉、18%豆粕(均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)，為高魚粉組]和負(fù)對(duì)照組(含18%魚粉、36%豆粕，為低魚粉組)，在負(fù)對(duì)照組飼料基礎(chǔ)上分別添加0.3%檸檬酸鈉、0.3%丁酸鈉、0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸，養(yǎng)殖周期為42 d。結(jié)果表明：與正對(duì)照組相比，負(fù)對(duì)照組凡納濱對(duì)蝦的增重率(WGR)、特定生長率(SGR)均顯著降低(P<0.05)，飼料系數(shù)顯著升高(P<0.05)，而添加0.3%丁酸鈉和0.3%檸檬酸鈉后，對(duì)蝦SGR和WGR均顯著高于負(fù)對(duì)照組(P<0.05)，F(xiàn)CR顯著低于負(fù)對(duì)照組(P<0.05)，添加0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸后，對(duì)蝦WGR和SGR與負(fù)對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)；與正對(duì)照組相比，負(fù)對(duì)照組中對(duì)蝦的免疫力下降，而添加0.3%檸檬酸鈉和0.3%丁酸鈉后，對(duì)蝦血清酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)和超氧化物歧化酶(SOD)活性較負(fù)對(duì)照組顯著提升(P<0.05)，而丙二醛(MDA)含量顯著降低(P<0.05)，血清ACP活性及MDA含量與正對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)，添加0.3%丙酸鈉后血清MDA含量較負(fù)對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，添加0.3%延胡索酸后血清溶菌酶活性顯著高于負(fù)對(duì)照組(P<0.05)，但ACP、AKP、SOD活性較負(fù)對(duì)照組降低(P<0.05)；各組凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物的Alpha多樣性指數(shù)無顯著性差異(P>0.05)，負(fù)對(duì)照組中放線菌門豐度下降，而添加0.3%檸檬酸鈉后雙歧桿菌和類桿菌的相對(duì)豐度較其他組顯著提高(P<0.05)，添加0.3%丁酸鈉后梭桿菌的相對(duì)豐度較其他組顯著提高(P<0.05)。研究表明，低魚粉飼料中添加有機(jī)酸能夠提高凡納濱對(duì)蝦的生長和免疫能力，調(diào)節(jié)腸道微生物平衡，其中添加0.3%檸檬酸鈉和0.3%丁酸鈉時(shí)效果最佳。

凡納濱對(duì)蝦Litopenaeus vannamei殼薄體肥、肉質(zhì)鮮美、含肉率高、營養(yǎng)豐富，與斑節(jié)對(duì)蝦Penaeus monodon和日本對(duì)蝦P.japonicus并稱為世界三大對(duì)蝦養(yǎng)殖品種[1]。近年來，隨著中國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展，凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量持續(xù)增加，對(duì)飼料的需求也不斷上漲，作為飼料主要原料的魚粉和魚油，由于資源短缺、價(jià)格高，限制了其在飼料中的使用[2]，然而，當(dāng)用廉價(jià)而資源豐富的植物蛋白源替代魚粉時(shí)，養(yǎng)殖動(dòng)物的健康就會(huì)受到一定影響，尤其會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物腸道產(chǎn)生一些病理變化[3-4]。

近年來，有機(jī)酸作為一種高效、無污染、無殘留的保健型飼料添加劑，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中越來越受到歡迎。大量研究表明，有機(jī)酸能降低胃腸道的pH值，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化，從而提高飼料的利用率，并促進(jìn)動(dòng)物的生長[5]。此外，有機(jī)酸還能抗菌、抑菌，并能提高機(jī)體的抗氧化能力，提高魚蝦的免疫力、抗病能力[6-8]。林雪等[9]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)以檸檬酸和延胡索酸為主要成分的酸化劑，可顯著提高羅非魚血清T-AOC、ACP及AKP活性，提高了魚體的抗氧化性能和免疫功能, 增強(qiáng)了抗應(yīng)激能力，同時(shí)還能在檸檬酸和延胡索酸的協(xié)同作用下調(diào)節(jié)代謝過程，減少有害微生物對(duì)宿主的傷害。栗雄高[1]研究發(fā)現(xiàn)，在凡納濱對(duì)蝦飼料中添加0.2%～0.3%檸檬酸能促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦生長，提高消化酶活性和免疫功能，并通過促進(jìn)蝦腸道內(nèi)有益菌的繁殖抑制有害菌繁殖，使腸道菌群結(jié)構(gòu)向有益方面改變，促進(jìn)維生素、鈣等元素的吸收，從而提高了水產(chǎn)動(dòng)物的抗病能力和抵抗力。尚衛(wèi)敏等[10]發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加檸檬酸和乳酸可以提高草魚Ctenopharyngodon idellus血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和溶菌酶活性，提高草魚的抗氧化能力和免疫功能。羅玲等[7]和魏朝青等[8]均研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉可以提高團(tuán)頭魴Megalobrama amblycephala和大菱鲆Scophthalmus maximus的抗氧化能力。Ring?[11]發(fā)現(xiàn)，在北極鮭Salvelinus alpinus日糧飼料中補(bǔ)充丙酸鈉可降低棕櫚酸含量，促進(jìn)生長和消化。

本試驗(yàn)中，選取檸檬酸鈉、丁酸鈉、丙酸鈉和延胡索酸4種有機(jī)酸，研究了其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長、免疫和腸道健康的影響，以期為促進(jìn)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展提供有益參考。

1 材料與方法

1.1 材料

養(yǎng)殖試驗(yàn)在天津市西青區(qū)畜牧基地水產(chǎn)局養(yǎng)殖試驗(yàn)示范基地進(jìn)行，試驗(yàn)用凡納濱對(duì)蝦由試驗(yàn)基地提供。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)飼料制備 試驗(yàn)設(shè)正對(duì)照組(記為D0，含24%進(jìn)口魚粉和18%豆粕的基礎(chǔ)飼料，為高魚粉組)和負(fù)對(duì)照組(記為D1，含12%進(jìn)口魚粉和36%豆粕，為低魚粉組)，在負(fù)對(duì)照組飼料基礎(chǔ)上分別添加0.3%檸檬酸鈉、0.3%丁酸鈉、0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸(均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)，記為D2、D3、D4、D5，并以正對(duì)照組為參考補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸，制成等氮等能的6種試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)成分水平見表1、表2(能量為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值)。飼料制作過程中，將所有飼料原料粉碎后過198 μm孔徑篩，然后加入魚油、磷脂、魷魚膏和蒸餾水，混合均勻后制成直徑為2 mm的硬性顆粒飼料，最后自然冷卻風(fēng)干后收放在密封袋中，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗(yàn)飼料原料組成
Tab.1 Ingredients of the experimental diets w/%

成分ingredient正對(duì)照組D0負(fù)對(duì)照組D1檸檬酸鈉組D2丁酸鈉組D3丙酸鈉組D4延胡索酸組D5進(jìn)口魚粉importedfishmeal24.0012.0012.0012.0012.0012.00豆粕soybeanmeal18.0036.0036.0036.0036.0036.00花生粕peanutmeal12.0012.0012.0012.0012.0012.00面粉wheatflour23.8516.5516.5516.5516.2516.55蝦粉shrimpmeal5.005.005.005.005.005.00谷朊粉glutenmeal3.003.403.403.403.403.40魷魚膏squidpaste5.005.005.005.005.005.00磷酸二氫鈣calciumdihydrogenphosphate2.002.002.002.002.002.00鹽salt0.200.200.200.200.200.20魚油fishoil3.003.603.603.603.603.60氯化膽堿cholinechloride0.500.500.500.500.500.50多維vitaminmixture0.100.100.100.100.100.10多礦mineralmixture0.200.200.200.200.200.20VC酯VCester0.100.100.100.100.100.10磷脂phospholipid2.002.002.002.002.002.00羧甲基纖維素carboxymethylcellulose1.001.001.001.001.001.00賴氨酸lysine00.200.200.200.200.20蛋氨酸methionine00.100.100.100.100.10檸檬酸鈉sodiumcitrate0.30丁酸鈉sodiumbutyrate0.30丙酸鈉sodiumpropionate0.30延胡索酸fumaricacid0.30

表2 試驗(yàn)飼料營養(yǎng)成分(干質(zhì)量)
Tab.2 Nutrient content of experimental diets(dry mass)

組別group粗蛋白質(zhì)/%crudeprotein粗脂肪/%crudelipid粗灰分/%crudeash水分/%moisture總能/(kJ·g-1)energypH正對(duì)照positivecontrol(D0)42.6212.7810.407.5115.285.98負(fù)對(duì)照negativecontrol(D1)42.5513.049.697.7415.366.09檸檬酸鈉sodiumcitrate(D2)42.8513.1210.127.6815.475.99丁酸鈉sodiumbutyrate(D3)42.9712.879.537.3015.395.96丙酸鈉sodiumpropionate(D4)42.4712.7710.157.6515.246.14延胡索酸fumaricacid(D5)42.9212.8410.207.5415.375.80

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與養(yǎng)殖管理 選取大小均勻、體格健康的對(duì)蝦720尾隨機(jī)分成6組，每組設(shè)3個(gè)平行，共用18個(gè)網(wǎng)箱(100 cm×100 cm×150 cm)，每個(gè)網(wǎng)箱投放40尾試驗(yàn)蝦(體質(zhì)量為7.54 g±0.40 g)，養(yǎng)殖周期為42 d。養(yǎng)殖期間，水溫為24～30 ℃，pH為8.42～8.88，溶解氧為7.11～8.97 mg/L，亞硝酸鹽≤0.01 mg/L，氨氮≤0.2 mg/L。

1.2.3 樣品采集 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)試驗(yàn)蝦禁食24 h，稱重計(jì)數(shù)。使用經(jīng)抗凝劑潤洗過的1 mL無菌注射器從蝦頭胸甲腹竇采集血液樣本，置于2 mL含有EDTA-2Na的離心管中，以3 000 r/min離心10 min，取血清于-80 ℃超低溫冰箱中保存。于無菌環(huán)境中取出腸道內(nèi)容物置于凍存管中，液氮速凍后置于-80 ℃超低溫冰箱中保存。

1.2.4 生長指標(biāo)測(cè)定與計(jì)算 增重率(WGR，%)、特定生長率(SGR，%/d)、飼料系數(shù)(FCR)計(jì)算公式分別為

WGR=(mt-m0)/W0×100%，

(1)

SGR=(lnmt-lnm0)/t×100%，

(2)

FCR=F/(mt-m0)。

(3)

其中：m0、mt分別為試驗(yàn)初始和終末凡納濱對(duì)蝦的總質(zhì)量(g)；F為養(yǎng)殖過程投餌干質(zhì)量(g)；t為養(yǎng)殖時(shí)間(d)。

1.2.5 血清抗氧化及免疫指標(biāo)測(cè)定 根據(jù)南京建成生物工程研究所相應(yīng)試劑盒操作說明書檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦血清酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。

1.2.6 腸道及內(nèi)容物多樣性測(cè)定 將凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物在北京科學(xué)院微生物研究所基因組研究中心進(jìn)行測(cè)序分析。將檢測(cè)合格的微生物DNA樣本對(duì)其指定區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增、文庫制備、文庫質(zhì)檢、定量，使用設(shè)定的TAG序列進(jìn)行樣本區(qū)分。采用Illumina Hiseq 2500高通量測(cè)序平臺(tái)對(duì)檢測(cè)合格的文庫進(jìn)行測(cè)序?；趦?yōu)化序列進(jìn)行OTU聚類分析和物種分類注釋，基于OTU聚類結(jié)果進(jìn)行多樣性指數(shù)分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 測(cè)序基本數(shù)據(jù)處理 采用Flash軟件對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行拼接，拼接得到的序列采用Trimmomatic進(jìn)行質(zhì)量過濾，用UCHIME去除嵌合體，最終得到高質(zhì)量的Tags序列。在一致性97%的水平上對(duì)序列進(jìn)行聚類，以測(cè)序所有序列數(shù)的0.005%作為閾值過濾OTU。

1.3.2 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean ± S.D.)表示。采用SPSS 19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，再用Duncan 法進(jìn)行組間多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 凡納濱對(duì)蝦生長性能的變化

從表3可見：與正對(duì)照組(高魚粉組)相比，負(fù)對(duì)照組(低魚粉組)凡納濱對(duì)蝦的終末體質(zhì)量、增重率、特定生長率均顯著降低(P<0.05)，飼料系數(shù)顯著升高(P<0.05)；而在負(fù)對(duì)照組基礎(chǔ)上，添加0.3%丁酸鈉與0.3%檸檬酸鈉，凡納濱對(duì)蝦的增重率和特定生長率均顯著高于負(fù)對(duì)照組(P<0.05)，飼料系數(shù)顯著低于負(fù)對(duì)照組(P<0.05)，添加0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸，凡納濱對(duì)蝦終末體質(zhì)量、增重率和特定生長率與負(fù)對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)；添加有機(jī)酸后，丁酸鈉組終末體質(zhì)量、增重率和飼料系數(shù)與正對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)，但特定生長率較正對(duì)照組顯著提高(P<0.05)，檸檬酸鈉組對(duì)蝦終末體質(zhì)量、特定生長率與正對(duì)照組無顯著性差異(P>0.05)。由此可見，添加檸檬酸鈉和丁酸鈉緩解了高豆粕替代魚粉造成的凡納濱對(duì)蝦增重率和特定生長率的下降。

表3 豆粕替代魚粉并添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能的影響
Tab.3 Effects of fish meal replaced by soybean meal and supplemented with different organic acids on growth performance of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

組別group初始體質(zhì)量/ginitialbodymass終末體質(zhì)量/gfinalbodymass增重率/%massgainrate特定生長率/(%·d-1)specificgrowthrate飼料系數(shù)foodconversionratio正對(duì)照positivecontrol7.59±0.50757.00±64.16a218.20±8.95a2.69±0.03b1.14±0.10d負(fù)對(duì)照negativecontrol7.53±0.41587.00±59.03bc181.64±6.12c2.36±0.04c1.40±0.01b檸檬酸鈉sodiumcitrate7.44±0.32660.67±38.07abc198.19±4.61b2.62±0.11b1.29±0.06c丁酸鈉sodiumbutyrate7.46±0.58710.33±76.92ab224.59±7.44a2.83±0.02a1.16±0.03d丙酸鈉sodiumpropionate7.65±0.36531.67±102.65c179.07±6.74c2.44±0.05c1.52±0.03a延胡索酸fumaricacid7.59±0.56592.00±62.79bc178.07±1.89c2.41±0.07c1.37±0.02bc

注：同列中標(biāo)有不同字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標(biāo)有相同字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)，下同。
Note:The means with different letters within the same column are significantly different in the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letter within the same column are not significant differences, et sequentia.

2.2 凡納濱對(duì)蝦血清抗氧化及免疫指標(biāo)的變化

從表4可見：與正對(duì)照組(高魚粉組)相比，負(fù)對(duì)照組(低魚粉組)凡納濱對(duì)蝦血清ACP、AKP、SOD、LSZ活性均顯著降低(P<0.05)，MDA含量顯著升高(P<0.05)；與負(fù)對(duì)照組相比，添加0.3%檸檬酸鈉后，凡納濱對(duì)蝦血清ACP、AKP和LSZ活性均顯著升高(P<0.05)，MDA含量顯著降低(P<0.05)，SOD活性呈現(xiàn)上升趨勢(shì)但無顯著性差異(P>0.05)；與負(fù)對(duì)照組相比，添加0.3%丁酸鈉后，血清ACP、SOD和LSZ活性顯著升高(P<0.05)，MDA含量顯著降低(P<0.05)；與負(fù)對(duì)照組相比，添加0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸后，AKP和SOD活性均顯著降低(P<0.05)，LSZ活性顯著升高(P<0.05)，丙酸鈉組MDA含量顯著降低(P<0.05)；添加有機(jī)酸后，除檸檬酸鈉和丁酸鈉組ACP外，各組ACP、AKP、SOD、LSZ酶活性均顯著低于正對(duì)照組(P<0.05)。

表4 豆粕替代魚粉并添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦抗氧化及免疫指標(biāo)的影響
Tab.4 Effects of fish meal replaced by soybean meal and supplemented with different organic acids on anti-oxidation and immunity of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

組別group酸性磷酸酶/(金氏單位·L-1)ACP堿性磷酸酶/(金氏單位·L-1)AKP丙二醛/(nmol·mL-1)MDA超氧化物歧化酶/(U·mL-1)SOD溶菌酶/(μg·mL-1)LSZ正對(duì)照positivecontrol0.41±0.02a33.43±1.79a2.76±0.86c44.82±1.75a1.12±0.03a負(fù)對(duì)照negativecontrol0.31±0.02b19.73±1.42c4.93±0.68a24.46±2.07c0.10±0.02e檸檬酸鈉sodiumcitrate0.37±0.05a26.90±4.23b2.77±0.28c25.55±0.56c0.71±0.01d丁酸鈉sodiumbutyrate0.38±0.03a23.20±0.30bc3.68±0.77bc31.82±2.05b0.82±0.03c丙酸鈉sodiumpropionate0.30±0.02b12.63±2.08d3.42±0.43bc15.37±1.24e0.80±0.01c延胡索酸fumaricacid0.29±0.03b13.26±1.02e4.28±0.47ab18.82±2.83d0.92±0.02b

2.3 凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物菌群微生物Alpha多樣性的變化

從表5可見：測(cè)序樣本中覆蓋率均大于99%，因而測(cè)序結(jié)果可代表凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物中微生物的真實(shí)情況；各組凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物的OTU數(shù)目、Chao1指數(shù)、香農(nóng)指數(shù)(Shannon)和辛普森指數(shù)(Simpson)均無顯著性差異(P>0.05)；添加0.3%檸檬酸鈉和0.3%丁酸鈉后，OTU數(shù)目、Chao1指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)值與正對(duì)照組內(nèi)容物菌群數(shù)值最相近，添加0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸后，物種豐富度及物種多樣性均較正對(duì)照組升高，與負(fù)對(duì)照組接近。

表5 豆粕替代魚粉并添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物菌群生物Alpha多樣性的影響
Tab.5 Effects of fish meal replaced by soybean meal and supplemented with different organic acids on biological Alpha diversity of microflora in the intestinal contents of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei

組別groupOTU數(shù)目OTUnumberChao1指數(shù)Chao1index香農(nóng)指數(shù)Shannonindex辛普森指數(shù)Simpsonindex覆蓋率coverage正對(duì)照positivecontrol986.00±130.981130.39±65.177.15±1.470.96±0.060.99±0.01負(fù)對(duì)照negativecontrol1064.67±19.351161.86±24.237.80±0.300.98±0.010.99±0.00檸檬酸鈉sodiumcitrate976.00±56.311142.88±25.766.41±1.530.89±0.130.99±0.00丁酸鈉sodiumbutyrate1027.33±56.571146.86±56.417.26±0.870.97±0.020.99±0.00丙酸鈉sodiumpropionate1077.00±49.031182.46±22.977.67±0.540.98±0.010.99±0.00延胡索酸fumaricacid1033.33±27.431159.02±21.987.08±0.920.98±0.070.99±0.00

2.4 凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物菌群結(jié)構(gòu)分析

2.4.1 基于門水平的菌群結(jié)構(gòu)分析 各組腸道內(nèi)容物菌群結(jié)構(gòu)在門水平上的組成如圖1所示，6個(gè)組的菌群在門水平上，主要由變形菌門Proteobacteria、藍(lán)藻門Cyanobacteria、放線菌門Actinobacteria、疣微菌門Verrucomicrobia、浮酶菌門Planctomycetes和厚壁菌門Firmicutes組成，相對(duì)豐度均達(dá)到94%以上，但是在各組所占比例有所不同。變形菌門、藍(lán)藻門、放線菌門、疣微菌門、浮酶菌門和厚壁菌門6個(gè)優(yōu)勢(shì)菌門在正對(duì)照組的占比分別為46.72%、11.48%、12.24%、12.49%、10.40%、1.42%，在負(fù)對(duì)照組的占比分別為35.13%、18.28%、8.31%、18.01%、12.91%、2.19%，在檸檬酸鈉組的占比分別為38.09%、7.27%、33.53%、5.70%、7.61%、3.13%，在丁酸鈉組的占比分別為24.37%、21.88%、7.51%、26.37%、14.40%、1.19%，在丙酸鈉組的占比分別為28.73%、23.57%、9.62%、17.68%、14.44%、1.38%，在延胡索酸組的占比分別為33.09%、17.93%、19.88%、10.45%、10.94%、2.09%。與正對(duì)照組相比，負(fù)對(duì)照組放線菌門的相對(duì)豐度有所下降，而浮酶菌門和藍(lán)藻門的相對(duì)豐度有所上升。在負(fù)對(duì)照組中添加0.3%檸檬酸鈉后，浮酶菌門和藍(lán)藻門的相對(duì)豐度低于負(fù)對(duì)照組，放線菌門的相對(duì)豐度高于負(fù)對(duì)照組；添加0.3%丁酸鈉和0.3%丙酸鈉后，浮酶菌門和藍(lán)藻門的相對(duì)豐度高于負(fù)對(duì)照組和正對(duì)照組，放線菌門的相對(duì)豐度低于負(fù)對(duì)照組和正對(duì)照組；添加0.3%延胡索酸后，浮酶菌門的相對(duì)豐度低于負(fù)對(duì)照組，放線菌門和藍(lán)藻門的相對(duì)豐度高于負(fù)對(duì)照組和對(duì)照組。綜上，添加0.3%檸檬酸鈉和0.3%延胡索酸后，凡納濱對(duì)蝦的腸道內(nèi)容物物種豐度與正對(duì)照組相似。

圖1 凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物基于門水平的菌群組成
Fig.1 Composition of microflora in the intestinal contents of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei on phylum level

2.4.2 基于科水平的菌群結(jié)構(gòu)分析 各組腸道內(nèi)容物菌群結(jié)構(gòu)在科水平上的組成如圖2所示，豐度超過0.25%的菌科有15個(gè)，其中，主要優(yōu)勢(shì)種有軟骨桿菌科Chthoniobacterales、扁平菌科Planctomycetaceae、紅桿菌科Rhodobacteraceae、腸桿菌科Enterobacteriaceae、長頸菜科Golenkinia longispicula和希氏藻科Shewanellaceae等。

圖2 凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物基于科水平的菌群組成
Fig.2 Composition of the microflora in intestinal contents of Pacific white leg shrimp micro florain Litopenaeus vannamei on family level

2.5 凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物菌群差異性分析

2.5.1 腸道內(nèi)容物菌群相對(duì)豐度分布 用相對(duì)豐度的常用對(duì)數(shù)(logarithm of relative abundance，LDA)值統(tǒng)計(jì)不同組別中有顯著作用的微生物類群，柱狀圖長度代表顯著差異物種的影響大小。如圖3所示，腸桿菌科在正對(duì)照組中顯著上調(diào)，漆草科Lachnospiraceae和未培養(yǎng)細(xì)菌unculturedbacterium在負(fù)對(duì)照組中顯著上調(diào)，雙歧桿菌科Bifidobacteriaceae在檸檬酸鈉組中顯著上調(diào)，梭桿菌科Fusobacteriaceae在丁酸鈉組中顯著上調(diào)，0319_6G20菌科在丙酸鈉組中顯著上調(diào)，類桿菌目Bacteroidales在延胡索酸組中顯著上調(diào)。這表明，添加不同的有機(jī)酸影響腸道菌群不同種類的豐度。

圖3 不同處理組對(duì)蝦腸道內(nèi)容物顯著差異菌群相對(duì)豐度
Fig.3 Relative abundance of the significantly different microflora in the intestinal contents of Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei in different treatment groups

2.5.2 在科水平上不同組的顯著差異菌群相對(duì)豐度比較 從表6可見：丁酸鈉組的梭桿菌科相對(duì)豐度高于其他組，但各組間無顯著性差異(P>0.05)；檸檬酸鈉組的雙歧桿菌科和類桿菌科相對(duì)豐度最高，且顯著高于其他組(P<0.05)；正對(duì)照組的腸桿菌科相對(duì)豐度最高，檸檬酸鈉組次之；負(fù)對(duì)照組的漆草科相對(duì)豐度分布最高，其次是檸檬酸鈉組。由此可見，添加0.3%檸檬酸鈉提高了腸桿菌、雙歧桿菌、類桿菌的組內(nèi)相對(duì)豐度，添加0.3%丁酸鈉提高了梭桿菌的相對(duì)豐度。

表6 豆粕替代魚粉并添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物顯著差異菌群科水平相對(duì)豐度的影響
Tab.6 Effects of fish meal replaced by soybean meal and supplemented with different organic acids on the bacterial relative abundance in the significantly different microflora in the intestinal contents in Pacific white leg shrimp Litopenaeus vannamei on family level

組別group腸桿菌科Enterobacteriaceae漆草科Lachnospiraceae雙歧桿菌科Bifidobacteriaceae梭桿菌科Fusobacteriaceae0319-6G20菌科0319-6G20類桿菌目Bacteroidales正對(duì)照positivecontrol0.1141±0.14630.0005±0.0003abc0.0002±0.0001bc0.0003±0.00010.0001±0.0000b0.0003±0.0002b負(fù)對(duì)照negativecontrol0.0114±0.00480.0014±0.0005a0.0008±0.0005ab0.0007±0.00000.0001±0.0000b0.0011±0.0009ab檸檬酸鈉sodiumcitrate0.0472±0.02220.0013±0.0011ab0.0011±0.0006a0.0002±0.00010.0000±0.0000b0.0017±0.0014a丁酸鈉sodiumbutyrate0.0033±0.00080.0003±0.0001bc0.0001±0.0001c0.0019±0.00140.0002±0.0001a0.0004±0.0001b丙酸鈉sodiumpropionate0.0073±0.00510.0001±0.0001c0.0001±0.0001c0.0013±0.00090.0002±0.0001a0.0003±0.0000b延胡索酸fumaricacid0.0053±0.00190.0004±0.0004bc0.0003±0.0003bc0.0013±0.00160.0001±0.0000b0.0006±0.0000ab

2.5.3 Dadogram進(jìn)化分支圖 Lefse進(jìn)化分支圖如圖4所示，其中，由內(nèi)至外輻射的圓圈代表了由門至屬的分類級(jí)別。在不同分類級(jí)別上的每一個(gè)小圓圈代表該水平下的一個(gè)分類，小圓圈直徑大小與相對(duì)豐度大小成正比。無顯著性差異的物種統(tǒng)一著色為黃色，差異物種跟隨組進(jìn)行著色，紅色節(jié)點(diǎn)表示在紅色組別中起到重要作用的微生物類群，綠色節(jié)點(diǎn)表示在綠色組別中起到重要作用的微生物類群，其他圈顏色意義類同。結(jié)果顯示，腸桿菌在正對(duì)照組發(fā)生富集，JG35_K1_AG5和漆草科菌在負(fù)對(duì)照組發(fā)生富集，雙歧桿菌在檸檬酸鈉組發(fā)生富集，梭桿菌在丁酸鈉組發(fā)生富集，0319_6G20菌科在丙酸鈉組發(fā)生富集，類桿菌在延胡索酸組發(fā)生富集，這與圖3顯示結(jié)果一致。

圖4 從門到屬的Lefse進(jìn)化分支圖
Fig. 4 Lefse evolutionary branch diagram from phylum to genus

3 討論

3.1 飼料中添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能的影響

有機(jī)酸在水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖飼料中起著誘食劑的作用，在魚蝦類飼料中添加有機(jī)酸能夠促進(jìn)魚蝦攝食，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長[1]。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，與正對(duì)照組(高魚粉組)相比，負(fù)對(duì)照組(低魚粉組)凡納濱對(duì)蝦的生長受到了抑制，而在負(fù)對(duì)照組基礎(chǔ)上添加0.3%檸檬酸和0.3%丁酸鈉后，凡納濱對(duì)蝦的特定生長率和增重率均較負(fù)對(duì)照組顯著升高，飼料系數(shù)顯著降低，且與高魚粉的正對(duì)照組相比，0.3%丁酸鈉組凡納濱對(duì)蝦也體現(xiàn)出了生長優(yōu)勢(shì)。這表明，檸檬酸和丁酸鈉能夠緩解高豆粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦帶來的生長抑制，并有效促進(jìn)其生長。與此相似，Liu等[12]研究表明，丁酸鈉不僅能改善魚類生長性能，增加腸道吸收面積，而且能減輕固有層混合白細(xì)胞的浸潤，證明有機(jī)酸對(duì)魚類腸道免受豆粕的損傷有積極作用，從而促進(jìn)魚類生長。齊鑫等[13]、孫浪等[14]、張曉曉等[15]分別在鱘、湘云鯽、凡納濱對(duì)蝦飼料中添加丁酸鈉也出現(xiàn)相似結(jié)果。栗雄高[1]、潘慶等[16]、Sarker 等[17]和 Khajepour等[18]則在凡納濱對(duì)蝦、羅非魚、鯛和達(dá)氏鰉飼料中添加檸檬酸同樣出現(xiàn)相似結(jié)果。相關(guān)研究表明，延胡索酸(又稱富馬酸)也可作為飼料添加劑，張玲等[19]發(fā)現(xiàn)，添加0.6%以檸檬酸、磷酸、富馬酸為主要成分的酸化劑可顯著提高草魚特定生長率，降低飼料系數(shù)。本試驗(yàn)中，低魚粉飼料中添加0.3%丙酸鈉和延胡索酸，凡納濱對(duì)蝦的生長性能與負(fù)對(duì)照組無顯著性差異，這與石澤[20]在無魚粉飼料中添加富馬酸后對(duì)建鯉的生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)與粗蛋白質(zhì)消化率無顯著性影響的結(jié)果一致，潘慶等[21]對(duì)羅非魚的研究中也得出相似結(jié)果。而Bjerkeng 等[22]則報(bào)道飼料中添加乙酸鈉、丙酸鈉和丁酸鈉的混合物對(duì)大西洋鮭生長性能無顯著影響。研究結(jié)果出現(xiàn)差異的原因，可能是由于添加有機(jī)酸鹽水平或者動(dòng)物種類不同，飼糧蛋白質(zhì)含量不同，酸的結(jié)合力就不同，消耗有機(jī)酸鹽的量也不同。

3.2 飼料中添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清抗氧化及免疫指標(biāo)的影響

凡納濱對(duì)蝦主要依靠非特異免疫系統(tǒng)防御病害因子，其中，最重要的免疫應(yīng)答因子有ACP、AKP、LSZ[6]。LSZ有殺菌、抗炎、抗病毒等作用，MDA是脂質(zhì)過氧化與氧化損傷最重要的產(chǎn)物[23-24]，其含量反映了生物體的脂質(zhì)過氧化水平，其含量降低代表機(jī)體抗氧能力的提高[24]。SOD對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。SOD和MDA都是表現(xiàn)機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)。Zhu等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在植物蛋白源飼料中補(bǔ)充有機(jī)酸，能顯著降低黃鲇血清SOD和CAT活性以及肝臟中CAT活性，這表明，有機(jī)酸能保護(hù)魚體免受植物蛋白源引起的氧化損傷。本試驗(yàn)中，負(fù)對(duì)照組對(duì)蝦血清ACP、AKP、SOD、LSZ活性較正對(duì)照組均顯著降低，MDA含量顯著升高，說明在飼料中添加過高含量的豆粕會(huì)降低凡納濱對(duì)蝦的非特異性免疫應(yīng)答，同時(shí)降低對(duì)蝦機(jī)體的抗氧化能力，造成對(duì)蝦免疫系統(tǒng)的失衡，從而影響對(duì)蝦的生長與免疫能力，這與段晶等[26]的研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)中，在負(fù)對(duì)照組飼料基礎(chǔ)上添加0.3%檸檬酸鈉和0.3%丁酸鈉后，ACP、AKP、SOD、LSZ活性較負(fù)對(duì)照組均有升高，MDA含量降低，基本達(dá)到正對(duì)照組的水平，添加0.3%丙酸鈉后，MDA含量較負(fù)對(duì)照組顯著降低，甚至達(dá)到正對(duì)照組水平。這表明，在飼料中添加有機(jī)酸能夠延緩飼料的氧化，減少水產(chǎn)飼料的浪費(fèi)，且能緩解豆粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦造成的機(jī)體損傷，降低因豆粕替代引起的MDA含量的增加，從而提高其抗氧化的能力和免疫功能，這與尚衛(wèi)敏等[10]、石澤[20]、張曉曉等[15]研究結(jié)果一致。

3.3 飼料中添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物微生物菌群的影響

腸道內(nèi)容物菌群與對(duì)蝦腸道健康有著密切的關(guān)系。本試驗(yàn)中，在負(fù)對(duì)照組中添加0.3%檸檬酸鈉和0.3%丁酸鈉，腸道內(nèi)容物菌群的物種豐富度和多樣性與正對(duì)照組最相似，但添加0.3%丙酸鈉和0.3%延胡索酸物種豐富度及物種多樣性與負(fù)對(duì)照組接近。同時(shí)，檸檬酸鈉組和丁酸鈉組的飼料pH與正對(duì)照組最接近，丙酸鈉組的飼料pH較正對(duì)照組偏高，而延胡索酸組的飼料pH相比于正對(duì)照組偏低。這說明腸道內(nèi)容物的菌群豐富度與多樣性可能與飼料pH有關(guān)。石澤[20]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加有機(jī)酸鹽可造成飼料中pH在一定程度上有所降低，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，只有檸檬酸組的建鯉在攝食0.5 h后前腸食糜pH有降低的趨勢(shì)。而Su等[27]研究發(fā)現(xiàn)，在凡納濱對(duì)蝦飼料中添加0.25%～0.30%的檸檬酸能提高腸道消化酶活性，從而改善其生長性能。這表明，飼料pH可以影響腸道內(nèi)容物的pH，通過激活蛋白酶影響腸道內(nèi)容物的菌群變化，影響對(duì)蝦腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而影響對(duì)蝦的生長，Gao等[28]的研究結(jié)果中也證實(shí)了有機(jī)酸對(duì)腸道菌群平衡具有積極作用。

有機(jī)酸還可以促進(jìn)腸道有益菌群的增殖，抑制有害菌的繁殖，進(jìn)而提高免疫能力。研究表明，有機(jī)酸和揮發(fā)油混合物對(duì)腸道菌群有較好的影響，可提高太平洋對(duì)蝦的免疫應(yīng)答和抗病性[29]。本試驗(yàn)中，各組在門水平上的菌群主要由變形菌門、藍(lán)藻門、放線菌門、疣微菌門、浮酶菌門、厚壁菌門組成，這與吳金鳳等[30]、李可等[31]的研究結(jié)果一致，證明凡納濱對(duì)蝦腸道內(nèi)容物菌群組成具有一定的保守性，藍(lán)藻門的豐度偏高可能是由于飼養(yǎng)環(huán)境為室外水體，對(duì)蝦的攝食并不完全來自養(yǎng)殖飼料，對(duì)蝦攝食水體中的藻類，使得對(duì)蝦腸道內(nèi)容物的多樣性增高。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加過高水平的豆粕降低了放線菌的豐度，在低魚粉水平下添加0.3%檸檬酸鈉后提高了放線菌的豐度，科水平上雙歧桿菌和類桿菌在檸檬酸鈉組發(fā)生富集且顯著高于正對(duì)照組，表明檸檬酸鈉促進(jìn)雙歧桿菌和類桿菌的增長，這與王麗娜等[24]的研究結(jié)果一致，說明檸檬酸鈉有利于雙歧桿菌和乳酸菌等有益菌的繁殖增長，對(duì)大腸桿菌和沙門菌屬等有害菌具有抑制作用；梭桿菌在丁酸鈉組發(fā)生富集，其次是丙酸鈉組和延胡索酸組，表明丁酸鈉促進(jìn)梭桿菌的增殖，同時(shí)也表明添加不同的有機(jī)酸會(huì)影響腸道不同種類菌群的豐度，這與曾晨爔等[23]的研究結(jié)果相符；根瘤菌依附于植物生長，在負(fù)對(duì)照組漆草科和根瘤菌顯著高于其他組，可能與負(fù)對(duì)照組中的藍(lán)藻門數(shù)量高有關(guān)。本試驗(yàn)中，腸道菌群的結(jié)果與生長、免疫方面的結(jié)果體現(xiàn)了一致性，低魚粉飼料中添加檸檬酸鈉和丁酸鈉后不僅可以促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦生長、提高抗病力，還可以調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡。

4 結(jié)論

1)本試驗(yàn)條件下，高比例豆粕替代魚粉后，凡納濱對(duì)蝦生長受到抑制，免疫力降低，優(yōu)勢(shì)菌群豐度下降，尤其以放線菌門最為突出。

2)高比例豆粕替代魚粉并添加有機(jī)酸后，凡納濱對(duì)蝦生長、免疫力得到了不同程度的提高，并能改善腸道菌群的平衡。綜合分析，4種有機(jī)酸中以丁酸鈉和檸檬酸鈉添加效果最佳。

參考文獻(xiàn)：

[1] 粟雄高.檸檬酸和微生態(tài)制劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長、消化酶活性和免疫性能的影響[D].上海:上海海洋大學(xué),2012.

LI X G.Effects of citric acid and microecologics on growth performance,digestive enzyme activity and immunity of white shrimp,Litopenaeus vannamei[D].Shanghai:Shanghai Ocean University,2012.(in Chinese)

[2] KIRON V.Fish immune system and its nutritional modulation for preventive health care[J].Animal Feed Science and Technology,2012,173(1/2):111-133.

[3] BAEVERFJORD G,KROGDAHL A.Development and regression of soybean meal induced enteritis in Atlantic salmon,Salmo salar L.,distal intestine:a comparison with the intestines of fasted fish[J].Journal of Fish Diseases,1996,19(5):375-387.

[4] HEDRERA M I,GALDAMES J A,JIMENEZ-REYES M F,et al.Soybean meal induces intestinal inflammation in zebrafish larvae[J].PLoS One,2013,8(7):e69983.

[5] CUVIN-ARALAR M L A,LUCKSTAEDT C,SCHROEDER K,et al.Effect of dietary organic acid salts,potassium diformate and sodium diformate on the growth performance of male Nile tilapia Oreochromis niloticus[J].Bulletin of Fish Biology,2011,13(1/2):33-40.

[6] 胡丹,韓慶,徐金石,等.有機(jī)酸在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2018(17):222-224.

HU D,HAN Q,XU J S,et al.Application of organic acids in aquaclture[J].Xiandai Nongye Keji,2018(17):222-224.(in Chinese)

[7] 羅玲,易德瑋,楊坤明,等.飼料中添加微囊丁酸鈉對(duì)高密度養(yǎng)殖條件下團(tuán)頭魴生長性能、非特異性免疫力及肝功能的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2018,30(7):2865-2871.

LUO L,YI D W,YANG K M,et al.Effects of microencapsulated sodium butyrate on growth performance,nonspecific immunity and hepatic function of blunt snout bream under high density culture condition[J].Chinese Journal of Animal Nutrition,2018,30(7):2865-2871.(in Chinese)

[8] 魏朝青,周慧慧,王璇,等.高植物蛋白質(zhì)飼料中添加丁酸鈉對(duì)大菱鲆幼魚生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率及肝臟抗氧化功能的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2017,29(9):3392-3402.

WEI C Q,ZHOU H H,WANG X,et al.Effects of adding different levels of sodium butyrate in high plant protein diets on growth performance,nutrient apparent digestibility coefficients and liver antioxidant function of juvenile turbot(Scophthalmus maximus L.)[J].Chinese Journal of Animal Nutrition,2017,29(9):3392-3402.(in Chinese)

[9] 林雪,段靜娜,趙玉蓉,等.不同組成酸化劑對(duì)羅非魚生長性能和抗氧化及肝臟代謝酶活性的影響[J].飼料工業(yè),2019,40(8):51-55.

LIN X,DUAN J N,ZHAO Y R,et al.Effects of different composition of acidifier on growth performance and antioxidant capacity and hepatic metabolic enzymes activity of tilapia[J].Feed Industry,2019,40(8):51-55.(in Chinese)

[10] 尚衛(wèi)敏,朱根廷,陳任孝,等.酸化劑對(duì)草魚生長和非特異性免疫能力的影響[J].淡水漁業(yè),2011,41(5):56-61.

SHANG W M,ZHU G T,CHEN R X,et al.Effects of acidifiers on the growth performance and non-specific immunity of Ctenopharyngodon idellus[J].Freshwater Fisheries,2011,41(5):56-61.(in Chinese)

[11] RING? E.Effects of dietary lactate and propionate on growth and digesta in Arctic charr,Salvelinus alpinus (L.)[J].Aquaculture,1991,96(3/4):321-333.

[12] LIU Y,CHEN Z C,DAI J H,et al.Sodium butyrate supplementation in high-soybean meal diets for turbot (Scophthalmus maximus L.):effects on inflammatory status,mucosal barriers and microbiota in the intestine[J].Fish & Shellfish Immunology,2019,88:65-75.

[13] 齊鑫,陳永光,張燕,等.丁酸鈉對(duì)鱘魚幼魚攝食及生長的影響[J].河北漁業(yè),2019(9):14-15,20.

QI X,CHEN Y G,ZHANG Y,et al.Effects of sodium butyrate on growth performance of the juvenile sturgeon Acipenser baeri[J].Hebei Fisheries,2019(9):14-15,20.(in Chinese)

[14] 孫浪,劉臻,郝光,等.丁酸鈉對(duì)湘云鯽蛋白質(zhì)代謝及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2013,25(11):2775-2782.

SUN L,LIU Z,HAO G,et al.Effects of sodium butyrate on protein metabolism and its related gene expression of triploid crucian carp(Carassius auratus tripl)[J].Chinese Journal of Animal Nutrition,2013,25(11):2775-2782.(in Chinese)

[15] 張曉曉,汪多,田相利,等.包膜丁酸鈉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長和血清非特異性免疫酶活性的影響[J].中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2017,47(sup 1):27-34.

ZHANG X X,WANG D,TIAN X L,et al.Effects of coated sodium butyrate on growth performance and serum non-specific immunity enzymes of Litopenaeus vannamei[J].Periodical of Ocean University of China,2017,47(sup 1):27-34.(in Chinese)

[16] 潘慶,譚永剛,畢英佐,等.檸檬酸對(duì)羅非魚生長、體成分和消化酶活性的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2004,11(4):344-348.

PAN Q,TAN Y G,BI Y Z,et al.Effects of citric acid on growth,whole body composition and activities of digestive enzymes in hybrid tilapia Oreochromis niloticus×O.aureus[J].Journal of Fishery Sciences of China,2004,11(4):344-348.(in Chinese)

[17] SARKER S A,SATOH S,KIRON V.Supplementation of citric acid and amino acid-chelated trace element to develop environment-friendly feed for red sea bream,Pagrus major[J].Aquaculture,2005,248(1/2/3/4):3-11.

[18] KHAJEPOUR F,HOSSEINI S A.Citric acid improves growth performance and phosphorus digestibility in Beluga (Huso huso) fed diets where soybean meal partly replaced fish meal[J].Animal Feed Science and Technology,2012,171(1):68-73.

[19] 張玲,張衛(wèi)東,趙德福,等.酸化劑在草魚飼料中的應(yīng)用效果研究總結(jié)[J].河南水產(chǎn),2017(6):12-13.

ZHANG L,ZHANG W D,ZHAO D F,et al.Research summary about application effect of acidifier in feed of the grass carp[J].Henan Shuichan,2017(6):12-13.(in Chinese)

[20] 石澤.蛋白酶、有機(jī)酸對(duì)異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)和建鯉(Cyprinus carpio var.Jian)生長、營養(yǎng)物質(zhì)利用率的影響[D].上海:上海海洋大學(xué),2016.

SHI Z.Effects of proteases and organic acids on the growth and nutrient utilization of allogynogenetic silver crucian carp (Carassius auratus gibelio) and Jian carp (Cyprinus carpio var.Jian)[D].Shanghai:Shanghai Ocean University,2016.(in Chinese)

[21] 潘慶,譚永剛,畢英佐,等.酸制劑對(duì)羅非魚生長和飼料利用的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2004,28(6):682-688.

PAN Q,TAN Y G,BI Y Z,et al.Effects of acid supplements on growth and feed utilization in tilapia Oreochromis niloticus×O.aureus[J].Journal of Fishries China,2004,28(6):682-688.(in Chinese)

[22] BJERKENG B,STOREBAKKEN T,WATHNE E.Cholesterol and short-chain fatty acids in diets for Atlantic salmon Salmo salar (L.):effects on growth,organ indices,macronutrient digestibility,and fatty acid composition[J].Aquaculture Nutrition,1999,5(3):181-191.

[23] 曾晨爔,林茂,李忠琴,等.基于16S rRNA基因擴(kuò)增子測(cè)序分析日本囊對(duì)蝦腸道菌群結(jié)構(gòu)與功能的特征[J].微生物學(xué)通報(bào),2020,47(6):1857-1866.

ZENG C X,LIN M,LI Z Q,et al.The structural and functional characteristics of the gut microbiota of Marsupenaeus japonicus as revealed by 16S rRNA gene amplicon sequencing[J].Microbiology China,2020,47(6):1857-1866.(in Chinese)

[24] 王麗娜,高飛,朱曉彤,等.不同有機(jī)酸對(duì)斷奶仔豬腸道厭氧培養(yǎng)微生物菌群的影響[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2015,36(6):9-14.

WANG L N,GAO F,ZHU X T,et al.Effects of different organic acids on anaerobically cultured intestinal microflora in weaned piglets[J].Journal of South China Agricultural University,2015,36(6):9-14.(in Chinese)

[25] ZHU Y,DING Q L,CHAN J,et al.The effects of concurrent supplementation of dietary phytase,citric acid and vitamin D3 on growth and mineral utilization in juvenile yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco[J].Aquaculture,2015,436:143-150.

[26] 段晶,吳莉芳,王婧瑤,等.不同大豆蛋白源替代魚粉對(duì)洛氏鱥生長、非特異性免疫及蛋白質(zhì)代謝酶活力的影響[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2019,34(6):804-810.

DUAN J,WU F L,WANG J Y,et al.Effects of replacing fish meal with different soybean proteins on growth performance,non-specific immune indices and protein metabolism in Rhynchocypris lagowskii Dybowski[J].Journal of Dalian Ocean University,2019,34(6):804-810.(in Chinese)

[27] SU X G,LI X Q,LENG X J,et al.The improvement of growth,digestive enzyme activity and disease resistance of white shrimp by the dietary citric acid[J].Aquaculture International,2014,22(6):1823-1835.

[28] GAO Y,HE J,HE Z L,et al.Effects of fulvic acid on growth performance and intestinal health of juvenile loach Paramisgurnus dabryanus (Sauvage)[J].Fish & Shellfish Immunology,2017,62:47-56.

[29] HE W Q,RAHIMNEJAD S,WANG L,et al.Effects of organic acids and essential oils blend on growth,gut microbiota,immune response and disease resistance of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) against Vibrio parahaemolyticus[J].Fish & Shellfish Immunology,2017,70:164-173.

[30] 吳金鳳,熊金波,王欣,等.腸道菌群對(duì)凡納濱對(duì)蝦健康的指示作用[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2016,27(2):611-621.

WU J F,XIONG J B,WANG X,et al.Intestinal bacterial community is indicative for the healthy status of Litopenaeus vannamei[J].Chinese Journal of Applied Ecology,2016,27(2):611-621.(in Chinese)

[31] 李可,鄭天凌,田蘊(yùn),等.南美白對(duì)蝦腸道微生物群落的分子分析[J].微生物學(xué)報(bào),2007,47(4):649-653.

LI K,ZHENG T L,TIAN Y,et al.Bacterial community structure in intestine of the white shrimp,Litopenaeus vannamei[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,47(4):649-653.(in Chinese)

相關(guān)知識(shí)

豆粕和黃粉蟲作為蛋白源對(duì)草魚攝食、生長、肉質(zhì)和健康的影響
發(fā)酵豆粕替代復(fù)合植物蛋白質(zhì)源對(duì)團(tuán)頭魴幼魚生長性能及腸道健康的影響
混合植物蛋白替代豆粕對(duì)黃河鯉魚生長、免疫及肝臟GH/IGF
環(huán)境污染對(duì)腸道菌群和免疫系統(tǒng)的影響
蛙源酵母菌ZR1發(fā)酵豆粕對(duì)牛蛙生長、消化和腸道健康的影響
飼料中添加荷葉提取物對(duì)草魚生長和機(jī)體健康的影響
凡納濱對(duì)蝦消化脂肪酶純化和生化分析=Purificationand.doc
斑節(jié)對(duì)蝦Relish基因的克隆及免疫刺激對(duì)其mRNA表達(dá)水平的影響
日糧中乙醇梭菌蛋白替代豆粕對(duì)草魚生長性能、健康狀況、肌肉品質(zhì)及其安全特性的影響
腸道菌群對(duì)人體健康的影響

網(wǎng)址: 豆粕替代魚粉并添加有機(jī)酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長、免疫和腸道菌群的影響 http://www.u1s5d6.cn/newsview1715490.html