首頁(yè) 資訊保健食品理化及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（2020年版）

保健食品理化及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（2020年版）

來(lái)源：泰然健康網(wǎng) 時(shí)間：2024年12月08日 01:10

中文名稱(chēng)：保健食品理化及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（2020年版）
英文名稱(chēng)：Guideline on the Inspection and Evaluation of Physicochemical and Hygienic Indicators of Health Food (2020)
發(fā)布時(shí)間：2020/10/31
實(shí)施時(shí)間：2020/10/31
發(fā)布單位：國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局

目錄
第一部分總則
一、主題內(nèi)容和適用范圍
二、基本要求
第二部分功效成分/標(biāo)志性成分檢驗(yàn)方法
一、保健食品中紅景天苷和酪醇的測(cè)定
二、保健食品中大蒜素的測(cè)定
三、保健食品中蘆薈苷的測(cè)定
四、保健食品中左旋肉堿的測(cè)定
五、保健食品中α-亞麻酸、γ-亞麻酸的測(cè)定
六、保健食品中人參皂苷的測(cè)定
七、保健食品中前花青素的測(cè)定
八、保健食品中核苷酸的測(cè)定
九、保健食品中洛伐他汀的測(cè)定
十、保健食品中槲皮素、山柰素、異鼠李素的測(cè)定
十一、保健食品中茶氨酸的測(cè)定
十二、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的測(cè)定
十三、保健食品中腺苷的測(cè)定
十四、保健食品中總皂苷的測(cè)定
十五、保健食品中總黃酮的測(cè)定
十六、保健食品中殼聚糖脫乙酰度的測(cè)定
十七、保健食品中總蒽醌的測(cè)定
十八、保健食品中10-羥基-2-癸烯酸的測(cè)定
十九、保健食品中絞股藍(lán)皂苷XL IX的測(cè)定
二十、保健食品中總?cè)频臏y(cè)定
二十一、保健食品中蟲(chóng)草素的測(cè)定
二十二、保健食品中D-甘露醇的測(cè)定
二十三、保健食品中功效成分/標(biāo)志性成分食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法
第三部分溶劑殘留的測(cè)定
第四部分違禁成分的測(cè)定

第一部分總則

一、主題內(nèi)容和適用范圍
1.本指導(dǎo)原則規(guī)定了保健食品及其原料、輔料理化及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)的基本要求、功效成分/標(biāo)志性成分檢驗(yàn)方法、溶劑殘留和違禁成分的測(cè)定要求。
2.本指導(dǎo)原則適用于保健食品的注冊(cè)和備案檢驗(yàn)。

二、基本要求
1. 保健食品應(yīng)符合《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 保健食品》（GB 16740）的各項(xiàng)要求和檢驗(yàn)方法規(guī)定。對(duì)于不同配方、不同形態(tài)、不同工藝的產(chǎn)品，申請(qǐng)人應(yīng)同時(shí)制定符合要求的理化、功效成分/標(biāo)志性成分、微生物等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效控制。
2. 直接接觸保健食品的包裝材料應(yīng)符合相應(yīng)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)規(guī)定。
3. 普通食品形態(tài)產(chǎn)品應(yīng)檢測(cè)并制定凈含量及允許負(fù)偏差指標(biāo)，指標(biāo)應(yīng)符合《定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則》（JJF 1070）規(guī)定。膠囊等非普通食品形態(tài)產(chǎn)品應(yīng)制定裝量或重量差異指標(biāo)。裝量或凈含量只檢測(cè)內(nèi)容物，不包括隔離材料。
4. 最小服用單元含有惰性隔離材料填充的產(chǎn)品，如膠囊，其功效成分或者指標(biāo)成分、農(nóng)藥殘留、灰分、水分等指標(biāo)以去除隔離材料（膠囊殼）的內(nèi)容物為檢測(cè)單元，對(duì)于非法添加藥物、重金屬、鉻、色素（如材料帶顏色）等則需要進(jìn)行整體檢測(cè)，或者檢測(cè)結(jié)果明確標(biāo)識(shí)相關(guān)檢測(cè)部位。
5. 本指導(dǎo)原則第二部分提供的檢測(cè)方法為推薦方法，注冊(cè)申請(qǐng)人在對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行功效成分/標(biāo)志性成分檢測(cè)時(shí)，應(yīng)選擇適合相應(yīng)產(chǎn)品的檢測(cè)方法。申請(qǐng)注冊(cè)檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)提供該產(chǎn)品的配方、工藝、產(chǎn)品技術(shù)要求及功效成分/標(biāo)志性成分檢測(cè)方法以及檢測(cè)方法的適用性、重現(xiàn)性等方法學(xué)研究材料。檢測(cè)方法應(yīng)科學(xué)、適用、重現(xiàn)。注冊(cè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)所附材料進(jìn)行審核，必要時(shí)進(jìn)行有關(guān)驗(yàn)證和方法確認(rèn)，如申報(bào)單位提供的方法不適合送檢的樣品時(shí)，注冊(cè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)不得擅自修改，應(yīng)將有關(guān)情況反饋申報(bào)單位，由其進(jìn)行研究并提供方法后，再對(duì)送檢樣品進(jìn)行試驗(yàn)，確保試驗(yàn)方法與送檢產(chǎn)品技術(shù)要求中規(guī)定的方法一致。復(fù)核檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)按照申報(bào)單位提交的檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)并出具復(fù)核檢驗(yàn)報(bào)告。
6. 注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)自行開(kāi)展或委托具備法定資質(zhì)的注冊(cè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照國(guó)家相關(guān)規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)等要求，根據(jù)樣品具體情況，合理地進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究。通過(guò)穩(wěn)定性試驗(yàn)，考察樣品在不同環(huán)境條件下（如溫度、相對(duì)濕度等）的化學(xué)、物理及生物學(xué)特征隨時(shí)間增加其變化程度和規(guī)律，從而判斷樣品包裝、貯存條件和保質(zhì)期內(nèi)的穩(wěn)定性。產(chǎn)品穩(wěn)定性重點(diǎn)考察指標(biāo)，主要包括感官、微生物、崩解時(shí)限（溶散時(shí)限、溶化性等）、水分、pH值、酸價(jià)、過(guò)氧化值、列入理化指標(biāo)中的特征成分等隨儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間容易發(fā)生變化的指標(biāo)。產(chǎn)品非穩(wěn)定性重點(diǎn)考察指標(biāo)，主要包括鑒別、灰分、污染物（如鉛、總砷、總汞等）、真菌毒素、農(nóng)殘（如六六六、滴滴涕等）、國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及現(xiàn)行規(guī)定有用量限制的合成色素和甜味劑等隨儲(chǔ)存條件和儲(chǔ)存時(shí)間不易發(fā)生變化的指標(biāo)，以及國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及現(xiàn)行規(guī)定有用量限制的抗氧化劑指標(biāo)。
穩(wěn)定性試驗(yàn)為注冊(cè)申請(qǐng)人自行開(kāi)展的，組織實(shí)施的檢驗(yàn)質(zhì)量控制、報(bào)告編制、樣品和檔案管理等工作以及出具的報(bào)告格式內(nèi)容，應(yīng)當(dāng)符合有關(guān)規(guī)定。穩(wěn)定性試驗(yàn)為注冊(cè)申請(qǐng)人委托檢驗(yàn)的，被委托單位應(yīng)當(dāng)為具有法定資質(zhì)的食品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)。
7. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不得檢出的項(xiàng)目結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果在方法定量限以上時(shí)，按照具體檢出值報(bào)送結(jié)果；檢測(cè)結(jié)果在方法檢出限以下時(shí)，注明“未檢出，檢出限值”；檢測(cè)結(jié)果在方法檢出限以上、定量限以下時(shí)，注明“檢出且小于定量限，定量限值，檢出限值”。
8. 保健食品中原料和輔料應(yīng)符合保健食品原輔料質(zhì)量要求的有關(guān)規(guī)定，有適用的國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等的，其質(zhì)量應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。原輔料質(zhì)量要求內(nèi)容有缺項(xiàng)難以或無(wú)需制定的，應(yīng)說(shuō)明原因。原料若為植物提取物或者原料及輔料加工過(guò)程中使用、間接引入有機(jī)溶劑時(shí)，涉及的有機(jī)溶劑應(yīng)符合《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760）附錄C中食品工業(yè)用加工助劑使用名單規(guī)定，或有關(guān)規(guī)定。企業(yè)可根據(jù)產(chǎn)品質(zhì)量控制需要，采用本指導(dǎo)原則中第三部分溶劑殘留的測(cè)定方法將溶劑殘留檢測(cè)列入原料或產(chǎn)品的技術(shù)要求。
9. 違禁成分的檢測(cè)作為相應(yīng)保健功能類(lèi)別產(chǎn)品的功能試驗(yàn)樣品注冊(cè)檢驗(yàn)要求，應(yīng)當(dāng)符合本指導(dǎo)原則第四部分的規(guī)定。?

第二部分
功效成分/標(biāo)志性成分檢驗(yàn)方法

一、保健食品中紅景天苷和酪醇的測(cè)定

1 范圍
本方法規(guī)定了以紅景天為主要原料的保健食品中紅景天苷和酪醇的液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于保健食品中紅景天苷和酪醇的測(cè)定。
2 原理
試樣經(jīng)甲醇超聲提取，以0.01mol/L乙酸銨-甲醇為流動(dòng)相（80+20），采用高效液相色譜法，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。
3 試劑和材料
注：除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1?試劑
3.1.1?乙酸銨（CH3COONH4）。
3.1.2?甲醇（CH3OH）：色譜純。
3.1.3?甲醇（CH3OH）。
3.2?標(biāo)準(zhǔn)品
紅景天苷、酪醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
表1 紅景天苷、酪醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量

中文名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子量

紅景天苷

Salidroside

10338-51-9

C14H20O7

300.30

酪醇

Tyrosol

501-94-0

C8H10O2

138.16

3.3?標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.3.1?紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（2.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品20mg（精確至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度，搖勻。
3.3.2?紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)工作液：將紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1）用甲醇（3.1.2）稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL，臨用時(shí)配制。
3.3.3?酪醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（2.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取酪醇標(biāo)準(zhǔn)品20mg（精確至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并定容至刻度，搖勻。
3.3.4?酪醇標(biāo)準(zhǔn)工作液：將酪醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.3）用甲醇（3.1.2）稀釋制備一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL，臨用時(shí)配制。
3.3.5?系統(tǒng)適用性溶液：量取紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1）和酪醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.3）各0.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀釋至刻度，搖勻。
3.4?試劑配制
乙酸銨溶液（0.01mol/L）：稱(chēng)取0.77g乙酸銨，加入適量水溶解并定容至1000mL，經(jīng)0.45μm濾膜（3.5.1）過(guò)濾后備用。
3.5?材料
3.5.1?水相微孔濾膜：0.45μm。
3.5.2?有機(jī)相微孔濾膜：0.45μm。
4 儀器和設(shè)備
4.1?高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器（UV）。
4.2?超聲波清洗器。
4.3?分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。
5 分析步驟
5.1?試樣制備
5.1.1?固體樣品：準(zhǔn)確稱(chēng)取已粉碎混合均勻的固體待測(cè)試樣適量（約含紅景天苷5mg）于 25mL容量瓶中，加入甲醇（3.1.3）約20mL，超聲提取30min，放冷至室溫，用甲醇（3.1.3）定容至刻度。混勻后經(jīng)0.45μm濾膜（3.5.2）過(guò)濾，供液相色譜分析用。
5.1.2?液體樣品：準(zhǔn)確吸取搖勻后的待測(cè)試樣適量（約含紅景天苷5mg），置于蒸發(fā)皿內(nèi)，水浴蒸干，用甲醇溶解并（3.1.3）轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中并定容至刻度?；靹蚝蠼?jīng)0.45μm濾膜（3.5.2）過(guò)濾，供液相色譜分析用。
5.2?儀器參考條件
5.2.1?色譜柱：C18柱， 250mm×4.6mm， 5μm，或同等性能色譜柱；
5.2.2?流動(dòng)相：乙酸銨溶液（0.01mol/L）-甲醇（80+20）；
5.2.3?流速：1.0mL/min；
5.2.4?柱溫：25℃；
5.2.5?檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；
5.2.6?進(jìn)樣量：10?L。
5.2.7?系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取系統(tǒng)適用性溶液（3.3.5）10?L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，紅景天苷峰與酪醇峰的分離度應(yīng)大于1.5。
5.3?標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
將紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）或酪醇標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.4）分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的色譜峰高或峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖見(jiàn)附錄A中圖A.1）。
5.4?試樣溶液的測(cè)定
將試樣待測(cè)液（5.1.1或5.1.2）注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測(cè)得峰面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液紅景天苷或酪醇的濃度（樣品溶液液相色譜圖見(jiàn)附錄A中圖A.2）。
6 結(jié)果計(jì)算
試樣中紅景天苷或酪醇含量按下式計(jì)算：

式中：
X—試樣中紅景天苷或酪醇的含量，單位為毫克每克或毫克每毫升（mg/g或mg/mL）；
C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得待測(cè)樣液中紅景天苷或酪醇的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；
V—樣品的定容體積，單位為毫升（mL）；
m—樣品量，單位為克或毫升（g或mL）。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

二、保健食品中大蒜素的測(cè)定

1 范圍

本方法規(guī)定了保健食品中大蒜素（二烯丙基三硫化物）的測(cè)定方法。

本方法適用于以大蒜及其加工品為主要原料制成的保健食品中大蒜素（二烯丙基三硫化物）的測(cè)定。

2 原理

試樣經(jīng)有機(jī)溶劑提取，通過(guò)氣相色譜檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3 試劑和材料

注：除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純。

3.1?試劑

3.1.1?無(wú)水乙醇（C2H5OH）。

3.1.2?正己烷（CH3(CH2)4CH3）。

3.1.3?無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）。

3.2?標(biāo)準(zhǔn)品

大蒜素標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥99.0%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

表1 大蒜素標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量

中文名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子量

大蒜素

Allitride

2050-87-5

C6H10S3

178.33

3.3?標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1 大蒜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.0mg/mL）：稱(chēng)取125.0mg大蒜素于25mL容量瓶中，用正己烷（3.1.2）定容至刻度，搖勻。此溶液可在4℃冰箱中保存七天。

3.3.2 大蒜素標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別準(zhǔn)確吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1），用正己烷（3.1.2）將其稀釋成大蒜素含量分別為0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，臨用配制。

3.4?材料

微孔濾膜：0.45μm，有機(jī)相。

4 儀器和設(shè)備

4.1?氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。

4.2?分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。

4.3?超聲清洗器。

5 分析步驟

5.1?試樣制備

5.1.1?固體試樣

稱(chēng)取已粉碎混合均勻的固體待測(cè)試樣適量（含待測(cè)組分約5mg，精確到0.0001g）于5mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇2.5mL，密塞，超聲（功率800W，頻率40kHz）提取20min，取出冷卻至室溫，加正己烷定容，搖勻，過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)試用。

5.1.2?油狀試樣

稱(chēng)取已混合均勻的油狀待測(cè)試樣適量（含待測(cè)組分約5mg，精確到0.0001g）于5mL容量瓶中，加正己烷溶解并定容，搖勻，過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)試用。

5.1.3?含水液體試樣

精密吸取已混合均勻的待測(cè)試樣適量（含待測(cè)組分約10mg），置于分液漏斗中，加4mL正己烷振搖提取1min，靜置分層，取上層清液過(guò)無(wú)水硫酸鈉，提取兩次。用適量正己烷沖洗無(wú)水硫酸鈉，合并至同一10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻。過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)試用。

5.2?儀器參考條件

5.2.1?色譜柱：（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷固定相，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25μm或其他同等性能色譜柱。

5.2.2?柱溫箱溫度：起始溫度100℃保持3min，10℃/min速度升至150℃，再以20℃/min速度升至200℃，保持20min。

5.2.3?進(jìn)樣口溫度：220℃。

5.2.4?檢測(cè)器溫度：250℃。

5.2.5?載氣：高純氮?dú)?，流?.0mL/min。

5.2.6?氫氣：40mL/min；空氣：400mL/min。

5.2.7?進(jìn)樣量：1μL。

5.3?測(cè)定

將1μL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.3.2）和試樣溶液（5.1）注入氣相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測(cè)得峰面積或峰高，外標(biāo)法定量。

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液圖譜及試樣溶液圖譜見(jiàn)附錄A。

6 結(jié)果計(jì)算

試樣中大蒜素含量按下式計(jì)算：

式中：

W—大蒜素的含量，單位為克每百克或克每百毫升（g/100g或g/100mL）；

A1—試樣溶液色譜峰面積或峰高；

A2—標(biāo)準(zhǔn)工作液峰面積或峰高；

C—標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；

V—試樣定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣的質(zhì)量或體積，單位為克或毫升（g或mL）；

100—單位轉(zhuǎn)換；

1000—單位轉(zhuǎn)換。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

7 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

三、保健食品中蘆薈苷的測(cè)定

1 范圍

本方法規(guī)定了保健食品中蘆薈苷含量的高效液相色譜測(cè)定方法。

本方法適用于以蘆薈及其加工品為主要原料的保健食品中蘆薈苷含量的測(cè)定。

2 原理

樣品用甲醇+水（55+45）作為溶劑，提取試樣中的蘆薈苷，經(jīng)C18柱分離，在293nm波長(zhǎng)處檢測(cè)，以蘆薈苷保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。

3 試劑和材料

注：除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1 試劑

3.1.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。

3.1.2 石油醚：沸程30℃～60℃。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)品

蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥90%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

表1 蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量

中文名稱(chēng)

英文名稱(chēng)

CAS登錄號(hào)

分子式

相對(duì)分子量

蘆薈苷

Aloin

1415-73-2

C21H22O9

418.39

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1 蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)樣品（3.2）10mg（精確至0.01mg）于25mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容至刻度，搖勻，此溶液濃度為0.4mg/mL。臨用新配。

3.3.2 蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1）0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL至10mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，得濃度為0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08mg/mL、0.16mg/mL、0.24mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

3.4 微孔濾膜：0.45μm，有機(jī)相。

4 儀器和設(shè)備

4.1 高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。

4.2 超聲波清洗器。

4.3 分析天平：感量分別為0.01mg和0.001g。

4.4 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥3000r/min。

5 分析步驟

5.1 試樣制備

5.1.1 固體試樣

稱(chēng)取已粉碎混合均勻的待測(cè)試樣適量（約含蘆薈苷4mg，精確到0.001g），置具塞錐形瓶中，加入50.0mL流動(dòng)相（5.2.2），稱(chēng)重，超聲處理20min，放冷，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（3.4）過(guò)濾，濾液待測(cè)。必要時(shí)可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

5.1.2 含油基質(zhì)試樣

稱(chēng)取已粉碎混合均勻的待測(cè)試樣適量（約含蘆薈苷4mg，精確到0.001g），置具塞錐形瓶中，加入25.0mL石油醚（3.1.2），渦旋使充分混勻，過(guò)濾，棄去石油醚液，再用少量石油醚洗滌錐形瓶及濾紙，揮干，將濾紙和殘?jiān)糜谠呷F形瓶中，加入50.0mL流動(dòng)相（5.2.2），稱(chēng)重，超聲處理20min，放冷，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（3.4）過(guò)濾，濾液待測(cè)。必要時(shí)可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

5.1.3 水性液體試樣

吸取待測(cè)試樣，必要時(shí)以流動(dòng)相（5.2.2）適當(dāng)稀釋?zhuān)x心，取上清液經(jīng)微孔濾膜（3.4）過(guò)濾。

5.2 儀器參考條件

5.2.1 色譜柱：C18柱， 250mm×4.6mm，5μm，或性能相當(dāng)者。

5.2.2 流動(dòng)相：甲醇（3.1.1）+水，（55+45，v/v）。

5.2.3 流速：1.0mL/min。

5.2.4 柱溫：40℃。

5.2.5 檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm。

5.2.6 進(jìn)樣量：10μL。

5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.4 試樣溶液的測(cè)定

將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液蘆薈苷的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中蘆薈苷的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。

蘆薈苷的標(biāo)準(zhǔn)液相色譜圖參見(jiàn)附錄A的圖A.1。

6 結(jié)果計(jì)算

試樣中蘆薈苷含量按下式計(jì)算：

式中：

X—試樣中蘆薈苷的含量，單位為克每百克（g/100g）或克每百毫升（g/100mL）；

C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中蘆薈苷的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；

V—試樣的最終定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣取樣量，單位為克（g）或毫升（mL）；

100—單位轉(zhuǎn)換；

1000—單位轉(zhuǎn)換。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

7 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

四、保健食品中左旋肉堿的測(cè)定

1 范圍
本方法規(guī)定了保健食品中左旋肉堿的液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于以左旋肉堿為主要原料的保健食品中肉堿的含量測(cè)定。

2 原理
試樣中的左旋肉堿以0.50mmol/L的鹽酸溶液經(jīng)超聲提取，反相色譜分離，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3 試劑和材料
注：除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 磷酸氫二鉀（K2HPO4）。
3.1.2 辛烷磺酸鈉（C8H17NaO3S）。
3.1.3 鹽酸（HCl）：含量：36%~38%。
3.1.4 磷酸（H3PO4）。
3.1.5 硅藻土（SiO2）：粒徑范圍：0.2-0.8mm。
3.1.6 乙腈（CH3CN）：色譜純。
3.2 標(biāo)準(zhǔn)品
左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
表1 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量
中文名稱(chēng) 英文名稱(chēng) CAS登錄號(hào) 分子式相對(duì)分子量
左旋肉堿 L-Carnitine 541-15-1 C7H15NO3 161.20
3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.3.1 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取25mg（準(zhǔn)確至0.01mg）左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）于25mL容量瓶中，用鹽酸溶液（3.4）溶解并定容至刻度，搖勻。此溶液濃度為1.0mg/mL。
3.3.2 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1）0.50mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL于5mL容量瓶中，用鹽酸溶液（3.4）稀釋至刻度，得濃度分別為0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL、0.60mg/mL、0.80mg/mL、1.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。臨用時(shí)配制。
3.4 鹽酸溶液（0.5mmol/L）：準(zhǔn)確吸取4.2mL鹽酸（3.1.3），用水定容至100mL。搖勻后，再吸取上述溶液1.0mL，用水定容至1L。
3.5 緩沖鹽溶液：分別準(zhǔn)確稱(chēng)取3.4g磷酸氫二鉀（3.1.1）和0.4325g辛烷磺酸鈉（3.1.2），用水溶解并定容至1L，搖勻，用磷酸（3.1.4）調(diào)至pH=2.5，經(jīng)微孔濾膜（3.6）過(guò)濾，待用。
3.6 微孔濾膜：0.45μm，水相。

4 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜儀：配有紫外（UV）檢測(cè)器或二極管陣列（DAD）檢測(cè)器。
4.2 分析天平：感量分別為0.01mg、0.0001g和0.001g。
4.3 超聲波提取器：功率250W，頻率33kHz。

5 分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 試樣提取
5.1.1.1 固體試樣
準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎并混合均勻的試樣0.1g~2g（準(zhǔn)確至0.0001g，含待測(cè)組分約5mg~50mg），于50mL容量瓶中，加入鹽酸溶液（3.4）約35mL，超聲提取10min，放至室溫，用鹽酸溶液（3.4）稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，棄初濾液，收集續(xù)濾液，再經(jīng)微孔濾膜（3.6）過(guò)濾，續(xù)濾液進(jìn)液相色譜儀分析。
5.1.1.2 軟膠囊試樣
取軟膠囊剪開(kāi)，擠出內(nèi)容物并混勻，準(zhǔn)確稱(chēng)取2g（準(zhǔn)確至0.0001g），準(zhǔn)確加入等量硅藻土（3.1.5），研至分散均勻，準(zhǔn)確稱(chēng)取其中部分（準(zhǔn)確至0.0001g，含待測(cè)組分約5mg~50mg），轉(zhuǎn)移至250mL具塞三角瓶中，吸取鹽酸溶液（3.4）50.0mL，并入三角瓶中，稱(chēng)重（準(zhǔn)確至0.001g），加塞超聲提取10min，放至室溫，用鹽酸溶液（3.4）補(bǔ)足重量，搖勻，過(guò)濾，棄初濾液，收集續(xù)濾液，再經(jīng)微孔濾膜（3.6）過(guò)濾，續(xù)濾液進(jìn)液相色譜儀分析。
5.1.1.3 液體試樣
準(zhǔn)確吸取混勻后的試樣1.0mL~5.0mL（含待測(cè)組分約5mg~50mg），于50mL容量瓶中，加入鹽酸溶液（3.4）約35mL，超聲提取10min，放至室溫，用鹽酸溶液（3.4）稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，棄初濾液，收集續(xù)濾液，再經(jīng)微孔濾膜（3.6）過(guò)濾，續(xù)濾液進(jìn)液相色譜儀分析。
5.1.2 試樣溶液稀釋
必要時(shí)，根據(jù)試樣溶液中左旋肉堿含量，用鹽酸溶液（3.4）進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專(zhuān)ㄏ♂尡稊?shù)F），使待測(cè)溶液中左旋肉堿的濃度在0.10mg/mL~1.00mg/mL范圍內(nèi)。
5.2 儀器參考條件
5.2.1 色譜柱：C18柱： 250mm×4.6mm，5μm或同等性能的色譜柱。
5.2.2 流動(dòng)相：緩沖鹽溶液（3.5）+乙腈（3.1.6），（90+10，v/v）。
5.2.3 流速：0.8mL/min。
5.2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。
5.2.5 進(jìn)樣量：20μL。
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
將左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.4 待測(cè)溶液的測(cè)定
將待測(cè)溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的待測(cè)溶液左旋肉堿的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)溶液中左旋肉堿的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。
左旋肉堿的標(biāo)準(zhǔn)液相色譜圖參見(jiàn)附錄A的圖A.1。

6 結(jié)果計(jì)算
試樣中左旋肉堿含量按下式計(jì)算：

式中：
X—試樣中左旋肉堿的含量，固體和軟膠囊試樣的單位為克每百克（g/100g），液體試樣的單位為克每百毫升（g/100mL）；
C—根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)溶液中左旋肉堿的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；
V—試樣提取時(shí)的定容體積，單位為毫升（mL）；
m—試樣稱(chēng)取的質(zhì)量，單位為克（g）；或液體試樣吸取的體積，單位為毫升（mL）；
F—稀釋倍數(shù)；
100—單位轉(zhuǎn)換；
1000—單位轉(zhuǎn)換。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。