堿提醇沉黑木耳多糖體外和體內(nèi)降血脂功能

于美匯 1,2，趙 鑫 1,2，尹紅力 3，劉 冉 4，王振宇 5,*

（1.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.通化師范學(xué)院制藥與食品科學(xué)學(xué)院，吉林 通化 134002；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所主食加工技術(shù)研究院，黑龍江 哈爾濱 151900；4.聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院，山東 聊城 252000；5.哈爾濱工業(yè)大學(xué)化工與化學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150090）

摘 要：目的：探討黑木耳多糖體內(nèi)和體外降血脂功能。方法：采用離體實驗?zāi)M人體胃和腸道的pH值環(huán)境，探討不同溶劑提取黑木耳多糖及其不同醇沉片段對膽酸鹽的結(jié)合能力，評價其體外降血脂功能。以高脂飼料喂養(yǎng)小鼠建立高血脂模型，通過黑木耳多糖的治療，比較治療前后小鼠體質(zhì)量、血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、總甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度總膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度總膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）含量及其關(guān)鍵酶卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（lecithin cholesterol acyltransferase，LCAT）、肝脂酶（liver lipase，HL）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）的活性，研究堿提黑木耳多糖對高血脂模型小鼠的降血脂作用。結(jié)果：體外降血脂實驗結(jié)果表明：3 種不同的黑木耳多糖樣品中，堿提黑木耳多糖的結(jié)合效果最好；不同體積分?jǐn)?shù)乙醇醇沉黑木耳多糖片段的結(jié)合效果比較顯示，70%醇沉片段結(jié)合膽酸鹽效果最好。體內(nèi)降血脂實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，堿提＋70%醇沉黑木耳多糖能夠緩解小鼠體質(zhì)量的增長，顯著緩解TC、TG和LDL-C含量的下降，顯著提升HDL-C水平，控制LCAT含量、HL和LPL活性的降低。結(jié)論：堿提＋70%醇沉黑木耳多糖具有降血脂功能。

關(guān)鍵詞：黑木耳多糖；膽酸鹽；降血脂；卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶

近年來，心腦血管疾病已成為危害人群健康最嚴(yán)重的疾病。據(jù)流行病學(xué)報告，在我國每小時約300 人死于心腦血管疾病，而且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，并且該病癥的發(fā)病年齡趨于年輕化 [1]。而脂質(zhì)代謝與心腦血管疾病密切相關(guān)，脂質(zhì)代謝紊亂所致的動脈粥樣硬化是引起心腦血管疾病發(fā)生、發(fā)展的重要危險因素 [2]。不僅如此，血脂濃度升高還會增加心腦血管疾病患者的死亡率，因此，如何通過飲食調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)生，引起了人們的廣泛關(guān)注 [3-5]。大量研究表明植物多糖具有降血脂、抗氧化等生物學(xué)活性，也因此植物多糖的降血脂功能成為當(dāng)今研究的熱點 [6-7]。

黑木耳（Auricularia auricular）是生長在朽木上的一種腐生菌，其子實體為食用部分，是我國廣泛食用的一種山珍食品 [8]。研究表明黑木耳多糖具有抗氧化、降血壓、抗炎、降血糖、保肝、降血脂等功效 [9-13]。有研究報道黑木耳多糖能夠降低高脂模型小鼠血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、總甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度總膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平，具有顯著的降血脂作用 [14]。有學(xué)者認為食物中功能性成分在腸道內(nèi)能與膽酸鹽結(jié)合，一方面影響脂類的消化和吸收，另一方面介入膽酸鹽的腸肝循環(huán)使膽酸鹽排出體外，促使肝臟中膽固醇不斷轉(zhuǎn)化為膽酸鹽，從而降低體內(nèi)膽固醇含量達到降血脂的目的 [15]。目前有關(guān)天然產(chǎn)物結(jié)合膽酸鹽能力的研究主要集中在殼聚糖 [16]、膳食纖維 [17]等，而有關(guān)多糖體外結(jié)合膽酸鹽能力的研究卻鮮有報道。本實驗選擇黑木耳作為研究對象，體外模擬胃腸道環(huán)境對其吸附膽酸鹽能力進行評價，篩選出體外降血脂活性最佳片段，通過建立小鼠高血脂模型對最佳片段的體內(nèi)降血脂活性進行活性跟蹤，測定小鼠血清TC、TG、高密度總膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、LDL-C含量，研究其降血脂功能，并測定膽固醇分解關(guān)鍵酶卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（lecithin acyltransferase，LCAT）、肝脂酶（liver lipase，HL）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）活性，對黑木耳多糖的降血脂作用機制進行分析，以期為黑木耳多糖的降血脂作用研究及其功能性食品的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

1.1.1 動物

SPF級昆明小鼠80 只（雄性，6～8 周齡，體質(zhì)量（20±2）g），均購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)。

1.1.2 材料與試劑

黑木耳購于黑龍江省海林市。

氯化鈉、氫氧化鈉 天津市永大試劑研發(fā)中心；無水乙醇、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉 哈爾濱天翔試劑有限公司；胃蛋白酶（1∶30 000）、胰蛋白酶（1∶250）上海源葉生物科技有限公司；?；悄懰徕c 成都西亞化工股份有限公司；甘氨膽酸鈉 上海金穗生物科技有限公司；透析袋（8～10 kD） 北京普博欣生物科技有限公司；辛伐他汀 哈藥集團三精明水藥業(yè)有限公司；生理鹽水 哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司；冰乙酸（分析純） 天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠。

TC試劑盒、TG試劑盒、LDL-C試劑盒、HDL-C試劑盒、蛋白測定試劑盒、LCAT試劑盒、HL試劑盒、LPL試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

FJ-200高速萬能粉碎機 上海申勝儀器公司；R-205B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、DHG-9240電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、R-205B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀YP200lN電子天平 天津泰斯特儀器公司；TDL-5臺式離心機 上海佑科儀器儀表有限司；DK-8D型電熱恒溫水槽 上海一恒科技有限公司；XW-80A漩渦混合器 江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司；722可見分光光度計、MR-96A酶標(biāo)儀 深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；全波長酶標(biāo)儀 美國Bio-Tek公司；潔凈動物培養(yǎng)箱 東北林業(yè)大學(xué)植物藥工程研究中心。

1.3 方法

1.3.1 黑木耳多糖的提取

原預(yù)處理：將黑木耳除雜、干燥、粉碎后，過40 目篩，得到黑木耳干粉，采用石油醚進行脫脂，再用95%乙醇除去低聚糖，干燥待用。

黑木耳多糖提?。簻?zhǔn)確稱取按上述處理得到的黑木耳干粉50 g 3 份，分別加入0.1 mol/L HCl溶液、蒸餾水、0.1 mol/L NaOH溶液中浸提，根據(jù)文獻[18]報道的提取條件，料液比為1∶80（m/V），提取溫度為室溫，提取時間為4 h。提取液在3 000 r/min條件下離心10 min，除去殘渣，殘渣再用蒸餾水提取（重復(fù)2 次）；合并上清液，將溶液pH值調(diào)為7.0后進行減壓濃縮，得到濃縮液，3 倍體積的100%乙醇醇析，反復(fù)將沉淀水溶醇析，烘干，分別得到酸提黑木耳多糖16.54 g、水提黑木耳多糖3.24 g、堿提黑木耳多糖18.96 g，密封保存?zhèn)溆?。? 種多糖復(fù)溶，苯酚-硫酸法 [19]測定其多糖含量，分別為酸提黑木耳多糖862.7 mg/g、水提黑木耳多糖784 mg/g、堿提黑木耳多糖871.1 mg/g。

1.3.2 黑木耳堿提多糖分級片段的制備

取50 g處理后黑木耳干粉，按上述提取方法對黑木耳進行堿提，得到堿提黑木耳多糖濃縮液，分別用50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇，按提取液3 倍體積加入到堿提多糖提取液中，充分?jǐn)嚢?，使溶液混合均勻。靜置過夜后抽濾、收集沉淀、烘干，得到6 段黑木耳堿提多糖，分別命名為：J-50、J-60、J-70、J-80、J-90、J-100，苯酚-硫酸法 [19]測定其多糖含量，密封保存?zhèn)溆谩?

1.3.3 體外結(jié)合膽酸實驗

1.3.3.1 膽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻[20]的方法測定，略作修改。分別取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（甘氨膽酸鈉0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.30 mmol/L，?；悄懰徕c0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mmol/L）2 mL于具塞試管中，加入6 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%的H 2SO 4溶液于70 ℃水浴20 min，取出冰浴5 min，在387 nm波長處測定吸光度。以膽酸鹽含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪得膽酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣液中膽酸鹽的濃度。

1.3.3.2 膽酸鹽結(jié)合實驗

分別移取3 mL不同處理方法得到的黑木耳多糖混合物樣品溶液（多糖溶液質(zhì)量濃度是以100%乙醇醇沉堿提黑木耳粗多糖配制的10 mg/mL多糖溶液中多糖含量為準(zhǔn)）于100 mL具塞三角瓶中，加入3 mL 10 mg/mL胃蛋白酶（以pH 6.3的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液配制），1 mL 0.01 mol/L的HCl溶液，在37 ℃條件下恒溫振蕩消化1 h，模擬腸道環(huán)境；以0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.3，隨后加入4 mL 10 mg/mL胰蛋白酶（以pH 6.3的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液配制），在37 ℃條件下恒溫振蕩消化1 h，模擬腸道環(huán)境進行消化。每個樣品中加入4 mL 0.4 mmol/L甘氨膽酸鈉（以pH 6.3的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液配制）、0.5 mmol/L?；悄懰徕c（以pH 6.3的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液配制），在37 ℃條件下恒溫振蕩1 h后混合物轉(zhuǎn)移至離心管中，4 000 r/min離心20 min，取上清液，比色法測定甘氨膽酸鈉和?；悄懰徕c含量，每個樣品平行5 次。甘氨膽酸鈉和牛磺膽酸鈉結(jié)合率按式（1）、（2）計算。

式中：c 1為甘氨膽酸鈉加入量/μmol；c 2為甘氨膽酸鈉剩余量/μmol。

式中：c 3為牛磺膽酸鈉加入量/μmol；c 4為?；悄懰徕c剩余量/μmol。

1.3.4 動物實驗

實驗用昆明種雄性小鼠78 只（體質(zhì)量（20±2） g）。實驗條件下，飼養(yǎng)在無毒塑料鼠盒中，每盒13 只，飼喂基礎(chǔ)飼料、涼開水，置于動物飼養(yǎng)箱內(nèi)，恒溫（23±2） ℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后記錄體質(zhì)量并開始實驗。隨機分組，每組13 只，分組為空白組、高脂模型組、陽性對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組。

1.3.4.1 高脂模型的建立

除空白組外其余各組小鼠喂食高脂飼料建造高血脂模型，高脂飼料為自由攝取，不定量30 d后測定空白組與其余各組小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。

1.3.4.2 分組灌胃給藥

模型建成后開始對小鼠進行灌胃，每組喂養(yǎng)飼料及灌胃受試物劑量如下：空白組：基礎(chǔ)飼料＋生理鹽水；高脂模型組：高脂飼料＋生理鹽水；陽性對照組：高脂飼料＋辛伐他丁溶液（3.33 mg/（kg·d））；低劑量組：高脂飼料＋堿提黑木耳多糖溶液（50 mg/（kg·d））；中劑量組：高脂飼料＋堿提黑木耳多糖溶液（100 mg/（kg·d））；高劑量組：高脂飼料＋堿提黑木耳多糖溶液（200 mg/（kg·d））。自由攝食和飲水，連續(xù)喂養(yǎng)60 d。其中，低、中和高劑量組分別灌胃提取液分別為人體推薦量的10、20、30 倍，陽性對照灌胃辛伐他汀3.33 mg/（kg·d），為常規(guī)用量人體推薦量的20 倍。

1.3.4.3 指標(biāo)測定

實驗周期60 d，定期稱體質(zhì)量，觀察動物形態(tài)。末次給藥后禁食，稱質(zhì)量并記錄，眼球取血法取全血，靜置30 min，離心分離血清，測定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。冰上取各肝臟，預(yù)冷生理鹽水沖洗后吸干水分，稱質(zhì)量記錄臟器質(zhì)量，－80 ℃冷凍備用。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

運用SPSS 16.0軟件進行方差分析（analysis of variance，ANOVA）單因素方差分析，數(shù)據(jù)以 ±s表示，組間做t檢驗，P＜0.05則表示有顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01為極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑木耳多糖體外結(jié)合膽酸鹽能力分析

2.1.1 不同溶劑提取黑木耳多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉能力的比較

圖1 不同溶劑提取黑木耳多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉能力
Fig. 1 Glycine cholate-binding capacity of Auricularia auricular polysaccharides (AAP) extracted by different solvents

酸提、水提、堿提的黑木耳多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉的能力比較結(jié)果見圖1，提取的不同多糖均能結(jié)合甘氨膽酸鈉，隨著質(zhì)量濃度的增加，甘氨膽酸鈉結(jié)合率均逐漸增強，且與質(zhì)量濃度之間呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系；比較不同質(zhì)量濃度的酸提、水提、堿提的黑木耳多糖對甘氨膽酸鈉的結(jié)合率可以看出，堿提黑木耳多糖的結(jié)合率的上升速率快于其他兩種多糖，且結(jié)合達到穩(wěn)定后，堿提黑木耳多糖的結(jié)合率最高，達到31.3%，其次為酸提黑木耳多糖，水提黑木耳多糖效果最差，僅為22.5%。

2.1.2 不同溶劑提取黑木耳多糖結(jié)合?；悄懰徕c能力的比較

圖2 不同溶劑提取黑木耳多糖結(jié)合牛磺膽酸鈉能力
Fig. 2 Taurine cholate-binding capacity of AAP extracted by different solvents

由圖2可知，酸提、水提、堿提的黑木耳多糖對?；悄懰徕c均具有一定的結(jié)合能力，且隨著質(zhì)量濃度的增加其結(jié)合率逐漸上升，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系，其中堿提黑木耳多糖的上升速率最快；在結(jié)合達到穩(wěn)定后，3 種多糖的最終結(jié)合能力依次為：堿提黑木耳多糖＞水提黑木耳多糖＞酸提黑木耳多糖，堿提黑木耳多糖最終結(jié)合率達到34.7%。

由3 種多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉和?；悄懰徕c的結(jié)果比較可以看出，堿提黑木耳多糖效果最優(yōu)，因此選其作為后續(xù)實驗的材料。

2.2 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇醇沉得到堿提黑木耳多糖片段結(jié)合膽酸鹽能力的比較

2.2.1 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇醇沉得到堿提黑木耳多糖片段結(jié)合甘氨膽酸鈉能力的比較

對堿提的黑木耳多糖分別用50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇分別醇沉，得到6 段多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉的結(jié)果見圖3，6 段多糖均能夠結(jié)合甘氨膽酸鈉，且多糖質(zhì)量濃度越大結(jié)合量越多；不同醇沉多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉最大結(jié)合率分別為22.26%、25.17%、34.15%、28.35%、21.99%、29.05%，其中70%乙醇醇沉得到的堿提黑木耳多糖結(jié)合效果最好，結(jié)合率為34.15%。

圖3 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇醇沉黑木耳多糖片段結(jié)合甘氨膽酸鈉的能力
Fig. 3 Glycine cholate-binding capacity of ethanol-precipitated fractions of alkali-soluble polysaccharides

2.2.2 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇醇沉得到堿提黑木耳多糖片段結(jié)合?；悄懰徕c能力的比較

50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇醇沉的堿提黑木耳多糖結(jié)合?；悄懰徕c的結(jié)果由圖4可知，6 段多糖均能夠不同程度地結(jié)合?；悄懰徕c，隨著質(zhì)量濃度的增加結(jié)合率不斷增大，且結(jié)合率與多糖質(zhì)量濃度呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系；不同醇沉多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉最大結(jié)合率分別為22.98%、23.96%、38.91%、25.43%、31.45%、36.00%，其中70%乙醇醇沉得到的堿提黑木耳多糖結(jié)合效果最好，結(jié)合率為38.91%。由6 段多糖結(jié)合甘氨膽酸鈉和?；悄懰徕c的結(jié)果比較可以看出，70%乙醇醇沉得到的堿提黑木耳多糖（J-70）結(jié)合能力最佳，因此選其為后續(xù)實驗的材料。

圖4 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇醇沉黑木耳多糖片段結(jié)合牛磺膽酸鈉的能力
Fig. 4 Taurine cholate-binding capacity of ethanol-precipitated fractions of alkali-soluble polysaccharides

2.3 堿提＋70%醇沉黑木耳多糖（J-70）體內(nèi)降血脂活性結(jié)果

2.3.1 黑木耳多糖對小鼠體質(zhì)量的影響

表 1黑木耳多糖對小鼠體質(zhì)量的影響（n=10）
Table 1 Effect of AAP on body weight of hyperlipidemic mice (n= 10)

注：a. 與空白組比較差異顯著（P＜0.05）；A. 與空白組比較差異極顯著（P＜0.01）；b. 與高脂模型組比較差異顯著（P＜0.05）；B. 與高脂模型組比較差異極顯著（P＜0.01）；c. 與陽性對照組相比較差異顯著（P＜0.05）；C. 與陽性對照組相比較差異極顯著（P＜0.01）。下同。

組別劑量/（mg/（kg·d））平均體質(zhì)量/g實驗前建模后實驗后空白組21.86±0.9527.32±1.1632.92±1.59 B高脂模型組21.78±1.8930.43±1.2041.33±0.82 AC陽性對照組3.3321.92±2.1130.27±1.3434.61±2.63 AJ-70低劑量組5021.53±1.9230.57±1.7338.98±1.13 AbCJ-70中劑量組10021.34±1.5230.40±1.5037.03±2.59 ABCJ-70高劑量組20021.71±2.0930.30±1.9735.69±2.07 B

由表1可知，在連續(xù)給藥30 d后，與空白組相比，高脂模型組小鼠體質(zhì)量極顯著增加（P＜0.01），可見長期的高脂飲食可影響體質(zhì)量變化。J-70低、中、高劑量組小鼠的體質(zhì)量相對高脂模型組比較均顯著降低（P＜0.05），說明J-70對于高脂小鼠體質(zhì)量的增長具有顯著的緩解作用，并且隨著給藥量的增加，小鼠體質(zhì)量的增加減緩，其中J-70高劑量組效果極為顯著（P＜0.01），對于高脂小鼠體質(zhì)量的增加的緩解效果與陽性對照組接近。

2.3.2 黑木耳酸性多糖對小鼠血清TG、TC、HDL- C、LDL-C含量的影響。

高脂血癥是血脂代謝異常所致，主要表現(xiàn)為血中TC、TG和LDL-C含量過高或HDL-C含量過低。HDL-C可以從肝外組織將膽固醇運送到肝內(nèi)進行降解，再排到體外，減少膽固醇沉積，LDL-C則是將肝臟合成的膽固醇轉(zhuǎn)運到全身組織。

由表2可知，與空白組相比，高脂模型組小鼠血清中TC、TG和LDL-C水平均極顯著（P＜0.01）升高，HDL-C水平極顯著降低（P＜0.01），這說明高脂模型建造成功。與高脂模型組相比，J-70低、中、高劑量和辛伐他汀能夠顯著降低小鼠TC、TG、LDL-L（P＜0.05）的水平，增加HDL-L（P＜0.01）水平，并且J-70低、中、高劑量組組間成一定劑量-效應(yīng)關(guān)系，其中高劑量組J-70效果最為顯著，這說明J-70對于高脂小鼠的血脂水平具有顯著的改善作用，且高劑量組與陽性對照組效果無顯著性差異。

表 2黑木耳多糖對小鼠血清 TG、TC、HDL-C、LDL-C水平的影響（n=10）
Table 2 Effect of AAP on TC, TG, HDL-C and LDL-C in serum of hyperlipidemic mice (n= 10)

組別劑量（mg/（kg·d））TC水平/（mmol/mL）TG水平/（mmol/mL）HDL-C水平/（mmol/mL）LDL-C水平/（mmol/mL）建模后實驗后建模后治療后建模后治療后建模后治療后空白組6.60±0.486.65±0.71 B1.52±0.111.54±0.30 B4.45±0.734.42±0.82 B1.47±0.191.48±0.67 B高脂模型組7.84±0.548.75±0.66 AC1.68±0.171.84±0.19 Ac3.62±0.222.64±0.54 AC1.61±0.491.95±0.69 AC陽性對照組3.337.82±0.396.41±0.26 Bc1.69±0.141.64±0.19 ab3.59±0.644.83±0.55 B1.62±0.281.46±0.47 BJ-70低劑量組507.79±0.628.03±0.68 AC1.70±0.161.79±0.13 Ac3.63±0.384.53±0.59 Bc1.59±0.621.79±0.21 AbcJ-70中劑量組1007.85±0.497.58±0.62 Abc1.69±0.121.71±0.14 A3.57±0.714.71±0.43 B1.58±0.361.69±0.24 ABcJ-70高劑量組2007.81±0.576.88±0.42 B1.71±0.141.64±0.21 ab3.61±0.495.00±0.32 B1.62±0.451.51±0.22 B

2.3.3 黑木耳多糖對小鼠肝臟LCAT水平的影響

機體內(nèi)過剩的膽固醇容易在細胞內(nèi)堆積，HDL可以將周圍組織中過剩的膽固醇運至肝臟以便排出體外，這一過程稱為逆向膽固醇轉(zhuǎn)運，LCAT是膽固醇逆轉(zhuǎn)錄過程中的關(guān)鍵限速酶，LCAT的水平直接影響到體內(nèi)過剩膽固醇的清除速率。

表 3 黑木耳多糖對小鼠肝臟LCAT水平、LPL和HL活力的影響（n=10）
Table 3 Effect of AAP on LCAT, LPL and HL in liver of hyperlipidemic mice (n = 10)

組別劑量/（mg/（kg·d））動物數(shù)量/只LCAT水平/（ng/mL）LPL活力/（U/mg pro）HL活力/（U/mg pro）空白組1029.86±4.55 BC23.24±4.05 BC23.74±3.32 Bc高脂模型組824.81±3.17 aC13.19±1.67 Ac11.63±4.15 AC陽性對照組3.33848.68±4.24 AB26.40±2.23 aB28.26±1.79 ABJ-70低劑量組507 38.46±2.16 ABC21.32±1.72 Bc22.78±3.14 BcJ-70中劑量組1009 44.34±2.57 ABc27.25±2.21 aB27.89±2.80 aBJ-70高劑量組2008 42.73±0.92 ABC29.86±1.15 ABC30.74±3.58 AB

由表3可知，高脂模型組小鼠肝臟LCAT水平顯著低于空白組（P＜0.01），可見高脂模型組小鼠肝臟清除膽固醇的速率明顯降低，而J-70各劑量組小鼠肝臟LCAT的水平均有不同程度的提高，其中J-70中劑量組的作用效果最為顯著，較高脂模型組相比提高了78.72%，這說明J-70能夠提高小鼠肝臟分解過剩膽固醇的能力。高脂模型組的LPL和HL活力與空白組相較均極顯著降低（P＜0.01），而在此方面辛伐他汀和J-70均有緩解作用，且J-70高劑量組的作用效果最佳，對于酶活性的提高高達29%，甚至優(yōu)于陽性對照組，說明在調(diào)節(jié)LPL和HL活性方面效果顯著（P＜0.01）。

3 結(jié) 論

膽汁酸是肝內(nèi)膽固醇衍生產(chǎn)物，經(jīng)分泌進入動態(tài)平衡的膽汁酸池，再經(jīng)由腸肝循環(huán)回到肝臟。研究表明，一些食品成分能與膽汁酸結(jié)合，加速體內(nèi)膽固醇的分解，有效降低人體血清和肝中膽固醇的含量 [21]；并且膽汁酸是腸道中脂肪的乳化劑，它能夠促進脂類水解和吸收，若膽汁酸被其他物質(zhì)結(jié)合，膳食中脂肪的吸收和利用便會得到抑制，從而達到降低血脂的目的。正常人膽汁酸中90%為結(jié)合型膽汁酸，肝臟中膽汁酸主要以膽酸鹽形式存在，并主要與甘氨膽酸和牛磺膽酸結(jié)合形成甘氨膽酸鈉或?；悄懰徕c，因此結(jié)合膽酸鹽的能力可作為降血脂的評定標(biāo)準(zhǔn)之一 [22-23]。

本實驗采取酸提、堿提、水提的辦法從黑木耳中分離得到3 種黑木耳多糖，通過對3 種黑木耳多糖體外結(jié)合膽酸鹽能力的比較得出，在相同的實驗條件下，堿提黑木耳多糖結(jié)合膽酸鹽的能力最強；50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇醇沉的堿提黑木耳多糖片段中，70%乙醇醇沉的片段結(jié)合膽酸鹽的能力最強。因為腸道中黑木耳多糖質(zhì)量濃度能達到較高水平，所以經(jīng)常食用會有助于降低血脂水平。因此以堿提＋70%醇沉黑木耳多糖片段進行體內(nèi)降血脂實驗，對其降血脂機制進行初步探討。

高血脂癥是血脂代謝異常所致，其主要表現(xiàn)為血漿中TC、TG和LDL-C水平過高或HDL-C水平過低。通過喂食小鼠高脂飼料使小鼠患高血脂癥后，通過堿提＋70%醇沉黑木耳多糖治療后小鼠的TC、TG及LDL-C水平較高脂模型組小鼠顯著降低，HDL-C的水平有所提高；肝臟中LCAT含量、HDL及HL活力均有不同程度提高。

血漿中的LDL-C，是人體內(nèi)血漿固醇的主要載體。過剩的膽固醇易在細胞內(nèi)，包括在血管內(nèi)皮細胞堆積，這是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的主要原因 [24]。HDL可以將周圍組織中過剩的膽固醇運至肝臟，以排出體外，而在膽固醇轉(zhuǎn)運過程中LCAT是關(guān)鍵酶，它與LPL一起共同作用于血漿脂蛋白，使經(jīng)LPL作用后積聚在極低密度脂蛋白，分子表面過量的卵磷脂和膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槿苎蚜字湍懝檀减?[25]。因此LCAT和LPL的水平直接影響到體內(nèi)過剩膽固醇的清除速率。

綜上分析，通過測定小鼠肝臟中LCAT含量、LPL活力來看，堿提＋70%醇沉黑木耳多糖降血脂的機制可能是通過提高LCAT含量，將外周組織中游離的膽固醇轉(zhuǎn)移到肝臟，并促進膽固醇轉(zhuǎn)化為膽固醇酯；通過提高LPL活性，催化TG水解成甘油和脂肪酸，促進膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運和代謝，從而達到降低血清TC和HDL-C水平，升高HDL-C水平的作用效果。

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In Vitro and in Vivo Hypolipidemic Effect of Auricularia auricular Polysaccharides

YU Meihui 1,2, ZHAO Xin 1,2, YIN Hongli 3, LIU Ran 4, WANG Zhenyu 5,*
(1. School of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, China; 2. School of Pharmaceutics and Food Science, Tonghua Normal University, Tonghua 134002, China; 3. Institute of Staple Food Processing Technology, Institute of Food Science and Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 151900, China; 4. College of Agriculture, Liaocheng University, Liaocheng 252000, China; 5. School of Chemistry and Chemical Engineering, Harbin Institute of Technology, Harbin 150090, China)

Abstract：Objective: To explore the hypolipidemic effect of Auricularia auricular polysaccharides in vitro and in vivo. Methods: Under simulated human gastric and intestinal pH conditions, the cholate binding capacity and in vitro hypolipidemic effect of Auricularia auricular polysaccharides extracted with different solvents and their alcohol-precipitated fractions. To evaluate the hypolipidemic effect of alkali-soluble polysaccharides from Auricularia auricular, the changes in body weight, serum total cholesterol (TC), total triglyceride (TG), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high density total cholesterol (HDL-C) and the activity of lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT), which is the key enzyme involved in HDL-C metabolism, and hepatic lipase (HL) and lipoprotein lipase (LPL) activities in hyperlipidemic rat models induced by high-fat feeding were detected before and after oral administration of the polysaccharides. Results: Among three different solvent soluble polysaccharides from Auricularia auricular, the alkali-soluble polysaccharides had the strongest cholate binding capacity, which was most ascribed to the 70% ethanol-precipitated fraction. In addition, this polysaccharide fraction could significantly alleviate body weight gain, slow down the increase in serum TC, TG and LDL-C, increase LDL-C signifcantly, and block the decrease in LCAT, HL and LPL activities. Conclusion: The 70% ethanol-precipitated fraction of alkali-soluble polysaccharides from Auricularia auricular had a signifcant hypolipidemic effect in experimentally induced hyperlipidemic rats.

DOI：10.7506/spkx1002-6630-201701039

中圖分類號：TS201.1

文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2017）01-0232-06

收稿日期：2015-12-15

基金項目：黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計劃項目（GA13B202）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項（DL11BA18）

作者簡介：于美匯（1990—），女，碩士研究生，研究方向為新資源功能食品開發(fā)。E-mail：314221479@qq.com

*通信作者：王振宇（1957—），男，教授，博士，研究方向為新資源功能食品開發(fā)。E-mail：wzy219001@163.com

引文格式：

于美匯, 趙鑫, 尹紅力, 等. 堿提醇沉黑木耳多糖體外和體內(nèi)降血脂功能[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(1): 232-237.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201701039. http://www.spkx.net.cn

YU Meihui, ZHAO Xin, YIN Hongli, et al. In vitro and in vivo hypolipidemic effect of Auricularia auricular polysaccharides[J]. Food Science, 2017, 38(1): 232-237. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201701039. http://www.spkx.net.cn

Key words:Auricularia auricular polysaccharides; cholate; hypolipidemic; lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT)

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