上海中醫(yī)藥大學附屬岳陽醫(yī)院麻醉科 

背景

化療相關的周圍神經病變（CIPN）是接受化療患者常見的副作用，其病理基礎是表皮層內的神經纖維（IENFs）減少，常表現為肢體遠端的麻木和痛覺過敏，嚴重影響患者的生活質量。研究顯示化療藥順鉑可導致脊髓小膠質細胞激活，而M1型小膠質細胞可以釋放促炎因子，如IL-1β、IL-6以及TNF-α等，導致疼痛；脊髓中G蛋白偶聯受體激酶2（GRK2）可抑制多種疼痛模型的疼痛信號傳導；電針可改善CIPN相關的疼痛，抑制小膠質細胞的活化以及炎癥因子的釋放，但關于電針改善CIPN的機制以及GRK2在CIPN中發(fā)揮何種作用尚未見報道，基于此來自復旦大學基礎醫(yī)學院中西醫(yī)結合學系和神經生物研究所的學者研究發(fā)現脊髓神經元GRK2的表達在電針抑制CIPN相關疼痛和感覺缺失中發(fā)揮了重要作用，該研究發(fā)表在最新一期的Anesthesia&Analgesia雜志上。中西合璧專欄對該文獻進行了編譯，以饗讀者。

方法

本研究包括三部分，首先明確上調脊髓神經元GRK2是否可以緩解順鉑誘發(fā)的CIPN，隨后驗證電針治療能否預防順鉑誘發(fā)的CIPN，以及下調脊髓神經元GRK2是否可減弱電針的預防效應，最終證實電針可以通過GRK2介導該效應的發(fā)生。研究利用順鉑（23mg/kg）腹腔內灌注建立CIPN大鼠模型（兩輪灌注，每輪連續(xù)5天，間隔5天），鞘內灌注含神經元特定促發(fā)因子的腺相關病毒（AAV）調控脊髓神經元表達GRK2；利用Westernblot檢測脊髓背角GRK2、髓細胞促發(fā)受體2（TREM2）和DNAX激活蛋白12kDa(DAP12)復合物（主要表達在脊髓的小膠質細胞中），利用Vonfrey纖毛和移除黏附物測試大鼠的機械痛和感覺缺失情況；利用免疫熒光檢測IENFs；利用RT-PCR檢測促炎及抗炎因子，從而觀察小膠質細胞的激活情況。電針治療情況：從順鉑注射前一天開始，電針治療1次/d，取雙側昆侖穴（BL60）和足三里（ST36），采用韓式電針儀，疏密波模式，1mA和2mA各刺激15min，假電針組不予電刺激治療。 

結果

圖1、神經元GRK2過表達可改善順鉑誘發(fā)的CIPN。A、5次順鉑灌注后的Westernblot檢測顯示順鉑灌注后的GRK2表達下降；B、實驗的技術路線圖，神經元特異性促發(fā)因子hSyn定位Cre-ERT2重組腺相關病毒被他莫昔芬活化，在首次注射順鉑3周后取標本；C、他莫昔芬活化的Cre-ERT2使脊髓GRK2上調；D、神經元細胞核（紅色）與eGFA標記的AAV-GRK2（綠色）在脊髓共標；E、神經元GRK2上調抑制CIPN導致的機械痛；F、神經元GRK2上調縮短CIPN導致的感覺缺失時間；G、大鼠后足的蛋白基因產物（PGP）9.5陽性神經纖維（白色）免疫熒光染色，顯示上調神經元GRK2可預防IEFNs減少；H、GRK2上調抑制CIPN相關的IEFNs減少。

圖2、神經元GRK2上調可抑制脊髓促炎因子釋放以及TREM2/DAP12的表達（小膠質細胞活化）。在首次注射順鉑3周后利用Western blot測定TREM2/DAP12，利用RT-PCR測定疼痛相關因子，包括IL-1β (C), IL-6 (D), iNOS(E), CD16 (F), IL-4 (G), IL-10 (H), and CD206 (I)。

圖3、電針治療可預防順鉑誘發(fā)的CIPN以及調控GRK2的表達。A、電針改善CIPN大鼠的機械痛；B、電針改善CIPN大鼠的感覺缺失；C、大鼠后足的蛋白基因產物（PGP）9.5陽性神經纖維（白色）免疫熒光染色，顯示電針可預防IEFNs減少；D、電針抑制順鉑誘發(fā)的IEFNs；E、脊髓背角GRK2的Westernblot顯示電針可逆轉順鉑誘發(fā)的脊髓背角GRK2的下降。

圖4、電針可抑制脊髓促炎因子以及TREM2/DAP12表達（小膠質細胞活化）。利用RT-PCR測定疼痛相關因子。包括IL-1β (A), IL-6 (B), iNOS(C), CD16 (D), IL-4 (E), IL-10 (F), and CD206 (G)；在首次注射順鉑3周后利用Western blot測定TREM2/DAP12。

圖5、脊髓神經元GRK2介導了電針對順鉑誘發(fā)的CIPN的緩解療效。A、Westernblot顯示特異性轉載蛋白病毒（syn-GRK2 shRNA）注射后成功下調了脊髓背角GRK2的表達；B、神經元細胞核（紅色）與eGFA標記的AAV-GRK2 shRNA（綠色）在脊髓共標；C、脊髓神經元GRK2下調抑制了電針對于順鉑導致的機械痛的鎮(zhèn)痛作用；D、脊髓神經元GRK2下調抑制了電針對于順鉑導致的感覺缺失的緩解作用；E、大鼠后足的蛋白基因產物（PGP）9.5陽性神經纖維（白色）免疫熒光染色，顯示神經元GRK2下調后，電針對順鉑誘發(fā)的IEFNs減少的預防作用減弱；F、神經元GRK2下調抑制電針對順鉑誘發(fā)的IEFNs減少的預防作用。

圖6、神經元GRK2介導電針對小膠質細胞的調控作用，RT-PCR測定了疼痛相關分子，包括IL-1β (A), IL-6 (B), TNF-α(C), iNOS (D), CD16 (E), IL-10 (F), IL-4 (G), TGF-β (H)，發(fā)現下調神經元GRK2后，促炎因子顯著升高；Western blot顯示下調神經元GRK2后TREM2/DAP12的表達升高，說明小膠質細胞的活性增強。 

結論

本研究證實順鉑誘發(fā)的CIPN模型GRK2表達下調；GRK2過表達及電針治療均可以改善順鉑誘發(fā)的機械痛、感覺缺失和IENFs的減少，以及抑制小膠質細胞活化，從而緩解順鉑誘發(fā)的CIPN；而電針的治療效應則是通過GRK2來介導的，提示GRK2可以作為CIPN防治的一個分子靶點。

中西合璧述評

臨床研究發(fā)現電針可改善CIPN相關的疼痛、麻木以及神經傳導速度，但機制不清，本研究發(fā)現GRK2是介導電針治療CIPN的重要分子。GRK2即β腎上腺素能受體激酶1，研究發(fā)現其在哺乳動物心臟、血管內皮細胞、腦、腎近曲小管、肺、肝臟和骨骼肌等組織中均有表達，在神經和免疫系統中高水平表達，可調節(jié)G蛋白偶聯受體快速脫敏，保護細胞免受過度刺激，改善炎性痛及神經病理性疼痛，除此之外，GRK2還可以直接和細胞內信號分子如絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinase，MAPK）家族成員、磷脂酰肌醇 3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）信號通路相關分子、細胞骨架蛋白相互作用，這使得 GRK2可以不依賴于 GPCRs，直接調節(jié)細胞內信號傳導。GRK2是近年來研究的熱點，尤其是在慢性疼痛領域。本研究的意義在于明確了GRK2在電針治療CIPN中的作用，為臨床應用電針治療CIPN提供了理論依據。

翻譯：季鋒；述評：油文靜，許華 參考文獻： Ma X, Chen Y, Li XC, Mi WL, Chu YX, Wang YQ,Mao-Ying QL. Spinal Neuronal GRK2 Contributes to Preventive Effect byElectroacupuncture on Cisplatin-Induced Peripheral Neuropathy in Mice.AnesthAnalg. 2022 Jan 1;134(1):204-215.

doi: 10.1213/ANE.0000000000005768.

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